去内毒素质粒高效提取攻略

2024-07-26 11:32   天津  
质粒是一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体,在分子生物学研究中对于质粒的产量和质量都有一定的要求,其中超螺旋比例内毒素含量是影响质粒质量的两个重要因素。

内毒素也称为脂多糖或者LPS,是革兰氏阴性菌(如大肠杆菌,E.coli)细胞壁中的一种成分,其毒性成份主要为类脂A。

内毒素结构图

细菌在其活跃生长时表面的内毒素成分较少,而一旦其死亡则会释放大量内毒素。在质粒提取的裂解过程中,内毒素会从细菌的外膜释放到裂解液中,从而严重影响质粒转染细胞的效率。此外,内毒素还会激活细胞的非特异性免疫反应,造成实验的假阳性。达领生物根据菌液量的不同开发了两款高效的内毒素去除产品——去内毒素快速质粒小量中提试剂盒(货号:TSP0301)去内毒素质粒大提试剂盒(通用型)(货号:TSP513)。


产品介绍


01
TSP0301
适合于从1015 mL细菌培养液中提取10~70 µg低内毒素的质粒DNA。
02
TSP513
适合于从100200 mL细菌培养液中提取100~1500 µg低内毒素的质粒DNA。
两款产品均采用独特的溶液体系,可处理各种质粒载体,包括常规高中低拷贝数的载体、大型载体,如BAC、Cosmid、P1等。TSP0301和TSP513纯化的质粒内毒素含量分别低于1 EU/µg和0.5 EU/µg,可直接用于细胞转染、动物注射等实验。


实验技巧



01
摇菌时间控制在1416 h之间,摇菌时间过长会增加RNA污染风险。

02
提质粒第一步需要完全去除培养液,必要时可用枪头吸干净,培养基里的细胞壁成分能抑制多种限制酶活性,影响后续实验。

03
提质粒加入第二个裂解液后需要温和翻转,不能剧烈震荡,以免打断基因组DNA。

04
若想提高质粒得率,最后一步洗脱的溶液可重新上柱离心。


选择指南



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达领生物
达领生物是擎科生物集团创立的新兴品牌,专注研发及生产生物试剂、IVD酶原料与仪器设备。
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