蛋白不表达？可能是感受态细胞没选对！

2024-07-08 17:03 天津

其实除了诱导条件影响蛋白表达之外，对蛋白表达来说，感受态才是“全或无”的影响。一些特殊的蛋白必须采用含对应功能的感受态才能完成蛋白表达，这也是为什么使用同样的感受态，有的蛋白能表达，而有的蛋白不能表达的原因。

接下来，各位小伙伴们请跟好达达的思路，一起来学习表达感受态的知识吧！

一、什么是表达感受态

受体细胞经过一些特殊方法处理后，细胞膜的通透性变大，能容许有外源DNA的载体分子通过，处于此种生理状态的宿主细胞即被称为感受态细胞（Competent Cell）。

表达感受态则是经转化后能够在一定条件下诱导产生目的蛋白的一类感受态细胞，常见的菌株有BL21、BL21（DE3）、Rosetta(DE3)、ER2566等。

二、如何选择表达感受态

根据目的蛋白特点和想要达到的实验目的来选择表达感受态，常见的蛋白表达需求可以参考以下方案：

非毒性蛋白、无稀有密码子等普通蛋白的表达

根据质粒的启动子类型选择表达感受态。比如由T7启动子驱动的蛋白表达（如：pET系列），需要选择含T7 RNA聚合酶的感受态，普通的BL21不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于该系列蛋白表达。

含稀有密码子的基因表达

部分基因含有稀有密码子，常规的表达感受态无法正常表达目的蛋白。而Rosetta(DE3) 感受态细胞则适合含稀有密码子基因的表达。

毒性蛋白表达

有些基因表达的目的蛋白对宿主大肠杆菌有毒害作用，影响宿主菌的生长，严重甚至致死。而BL21 AI菌株T7聚合酶严格受阿拉伯糖调控，本底表达较低，适用于毒性蛋白的表达。同时，BL21 (DE3) pLysS/pLysE菌株表达T7溶菌酶，其T7聚合酶受到T7溶菌酶的抑制，本底表达水平较低，也可用于毒性蛋白的表达。

杂蛋白多（背景高）的蛋白表达

蛋白表达时杂蛋白太多，影响目的蛋白电泳时的判断。此时可以选用本底表达量低的感受态，如BL21(DE3) pLysS。

三、知识延伸

毒性蛋白

某些基因在原始生物体以外物种表达出来的蛋白质可能会对宿主的生长产生影响，在做大肠杆菌原核表达时产生的蛋白可能会抑制宿主大肠杆菌的生长，严重的致死宿主菌，使蛋白表达失败。

稀有密码子

不同物种有不同的密码子偏好性，如果外源蛋白中含大量大肠杆菌的稀有密码子，特别当这些稀有密码子呈连续分布的时候，就会造成蛋白表达量很低，或者翻译提前终止。

四、好物分享

达领生物拥有丰富种类的表达感受态细胞，可以满足大部分同学的实验需求，欢迎大家按需选择～

达领生物

达领生物是擎科生物集团创立的新兴品牌，专注研发及生产生物试剂、IVD酶原料与仪器设备。

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