部分材料来源：体外诊断IVD知识库
1、 蛋白与膜的结合
蛋白与膜的结合原理， 已知的结合力包括疏水作用力\H键\静电作用力等，确切的结合原理并不明确，有两种观点:
首先两者靠静电作用力结合， 然后靠H键和疏水作用来维持长时间结合。
首先两者靠疏水作用结合， 然后靠静电作用来维持长时间结合。
两条观点并无本质的差异，在结合过程各种作用都存在，无非谁先谁后。
2、 膜对结合的影响
（1）膜孔径
对于同一厂家的膜，随着膜孔径减小，膜的实际可用表面积递增，膜结合蛋白的量也递增。估量表面积的参数为表面积比率(实际可用表面积与所用膜平面积的比率)。
膜孔径越小，层析也越慢，金标复合物通过T线的时间也就越长，反应也就越充分。
综上，膜孔径越小，灵敏度越高。但是同时也减慢了跑板速度，增加了非特异性结合的机会，也就是假阳性越高。
（2）不同厂家的膜差异
膜生产时，使用的聚合物和表面活性剂的来源，类型，数量不同。而这些成分对层析反应体现的性能都会产生较大影响。因此需要开发产品需要匹配不同厂家的膜
3、 生物原料，缓冲溶液的试剂和配方
（1）生物原料
首先，单克隆抗体与膜的结合优于多克隆抗体， 主要时由于多克隆抗体有很多不同的表面位点， 而各位点与膜的最佳结合条件都有细微的差别， 毫无疑问就增加了优化难度。
其次，分子量越大，蛋白越难结合到固相材料上。
（2）缓冲液
大家最关心的可能就是希望获得一个性能优良的配方，包括缓冲液，封闭液等等处理溶液配方。
因为不同的反应体系需要不同的配方来支持， 而不同机构的反应体系又有差异。所以不存在一个万能的配方。只有根据不同的产品和原料进行摸索和调试。
缓冲液的构成一般是: PBS，再加上一些调节吸附性能和保持稳定性的物质。
常用附加物质大致罗列如下:
有机醇(甲醇，异丙醇等)，润湿膜，减少膜带有的静电，利于结合包被。
表面活性剂(TW20,TX100)，增加亲水力，可避免线条中空现象，也可增色。但是容易引起扩散。降低吸附
糖，增加稳定性，也可以增加亲水力
4、 点样环境
环境湿度对点膜过程非常重要。最佳湿度一般在45-65%。
湿度过低，膜上容易聚集静电荷，点膜容易出现散点，导致测试会出现疏水斑。
湿度过高，膜上毛细作用加强，点膜容易引起CT线变宽甚至扩散。
为了保证点样时膜湿度的均一性，一般在点样前把膜放到该湿度条件下平衡一段时间。
5、 点样仪器与膜面情况的关系
目前有两种点样方式，划膜式和非接触点膜式。非接触点膜式优于划膜式。因划膜式为软管将抗体划到膜表面，而膜本身的物理性质为软脆，划管会在其表面留下印痕。
6、 点样位置
不同的T线点样位置将带来不同的灵敏度。点样位置靠上，金标复合物通过T线位置反应时间增加，灵敏度升高。反之灵敏度降低。一般点膜位置固定，比较少通过这样的方式去做微调。
7、 溶液在膜上的扩散
溶液在膜上的点样量一般情况下为1ul/cm.
溶液在膜上的扩散是趋向两端的，喷点上去的是均匀的抗体溶液，但当干燥时线条边缘的干燥速度高于中间，中间的抗体会不断向两边扩散，所以干燥后抗体是向线条的两端聚集的。
一般情况下不影响检测结果试验。如果发现线条出现两端红，中间淡的现象，可以添加上面说的附加物质尝试解决。
8、 点膜后的封闭
常见的封闭方式如下
流动封闭，将作用物质处理在样品垫上，以及金标垫上，包括蛋白，表面活性剂，PVP，PVA等。
膜上封闭，直接将封闭液喷点在膜上。让封闭液完全浸润膜。
浸泡封闭，在膜喷点完CT线，并且干燥以后，直接将膜浸泡在封闭溶液里，如脱脂奶粉配制的封闭液。
9、 膜的储存
储存膜一般要求是避光，密封。不能存储在过于干燥的环境。理想的保存湿度40%-60%。在这种保存条件下，一般可以放置3年。
点膜时如果遇到T线不均匀扩散，成锯齿状，可能保存时过于干燥，膜上带走静电，可以在以上的湿度的环境下平衡过夜。
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