“微度”大刊解读——临床微生物检验自动化流水线应用专家共识

  全自动微生物自动化流水线在我国的应用尚处于起步阶段，缺乏临床微生物检验自动化流水线应用的相关标准。为推进自动化技术的发展，中华医学会检验医学分会和中国医学装备协会检验医学分会组织制定了《临床微生物检验自动化流水线应用专家共识》（以下简称共识）。本共识编写工作组由全国23个省市自治区的66家医疗机构及企业共75位专家组成，包括5位执笔专家（四川大学华西医院实验医学科谢轶教授，山东大学第二医院检验医学中心张旭华教授，河南省儿童医院检验科高凯杰教授，深圳市宝安区妇幼保健院检验科吴丽娟教授，四川大学华西第二医院医学检验科江咏梅教授）、26位编写专家、42位编审专家以及2位通讯作者（山东大学第二医院王传新教授、中国医学科学院北京协和医院检验科徐英春教授）。

  共识围绕自动化流水线的临床应用问题，讨论了应用前期需要考虑的实际要素，评价了应用过程中流水线的技术特点，特别指出应用后实验室面临的检验流程再造等问题，最后提出实施微生物自动化流水线的挑战和展望。执笔专家和编写专家对微生物检验自动化流水线的定义进行规范，对流水线的应用优势和流程改进措施进行梳理及总结，也分析了流水线的临床应用价值和不足。希望通过本共识推动临床微生物检验自动化的进程，改变临床微生物检验自动化程度低、检测时间长、标准化难的现状。同时在大微生物概念下，希望通过本共识扩大检验从业者的知晓率和使用率，在临床实践中推动该专家共识的推广、应用和改进的良性循环发展。共识凝练出15条专家共识，主要涉及内容如下：

  按照目前的定义， 微生物检验自动化流水线应至少包括2个或2个以上自动化模块以及将两者连接起来的自动轨道，如自动接种-轨道-孵育系统。

  临床微生物实验室配备自动化流水线的目的在于实现更好的质量控制，如提高分离率、缩短标本周转时间（Turn Around Time, TAT）、保障生物安全以及提升可溯源性，最终为临床医疗带来最大获益。

  全自动流水线适宜的标本容器需要考察多个参数，包括形状、大小、是否是螺口、硬度和脆性。标本容器需要适配前处理标本架，并可兼容国内外型号。

  划线模式的选择应基于能得到更多的单个菌落。大部分标本经自动划线的分离效果较手工划线好，携带菌量较高的标本（如粪便、部分痰液等）需要评估。自动划线未分离出单个菌落时，需进行手工分纯。

  自定义的智能孵箱培养条件通常为5%-10%CO2，35℃-37℃，不同标本类型选择适宜的孵育时间。首次拍照时间可设置为培养8-12h，实时拍照时间常为4-6h，可根据样本类型设置拍照间隔。无需CO2环境培养的平板可经流水线处理后，人工转移至普通培养箱。

  自动化流水线的平板图像模块可实现微生物生长情况图像化、数字化。通常采用最近一次拍摄的图像进行判读，最近一次图像不易判读时，可回顾前期图像，实现图像可溯源性。判读完毕后，标注的平板可经轨道传输至自动制备模块，进行后续操作。

  自动划涂方式形成了涂片梯度，使涂片容易观察。消化后的痰液标本10μL、1次取样常能获得较好涂片效果。血培养阳性标本涂片时，亦可采用自动涂片功能。除痰液和血培养阳性标本外，其他标本的取样涂片参数需评估。

  高浓度菌悬液常为2-3麦氏浊度单位，1μL点样。当浊度不足时，可重复点样操作。自动制备模块避免了手工操作带来的差错，易于标准化。自动制备模块需要匹配特定的靶板和质谱仪。

  全自动微生物检验流水线的使用能减少的手工劳动包括平板标签打印粘贴、平板转运、标本的取样、涂片、接种和划线等。能改变的工作模式包括平板拍摄和阅读、阴性标本自动卸载、岗位设置和排班规则。

  全自动微生物检验流水线和LIS系统共同提供了微生物检验的流程信息，使微生物检验可以实现标本全流程溯源管理。实验室应根据流水线功能建立相应的标本跟踪日志，减少标本漏检和平板遗失。

  对微生物标本和培养物进行处理时，使用全自动流水线可以减少气溶胶产生，保证实验室生物安全。流水线控制的主要生物安全环节包括标本开盖、取样、涂布和划线、平板运输和开盖、培养箱开箱、质谱点样和菌液调制。

  当使用全自动流水线适配的标本容器采集液体标本时，接种模式可采用全自动、半自动和手工接种。痰液标本可经液化后，按照液体标本处理。不能液化的标本采用手工接种。无论哪种方式接种完毕后，均可采用预设的划线方式，进行自动划线及后续培养。

  自动化流水线作为临床微生物检验工作的硬件设备，需符合临床微生物实验室质量控制体系要求。现有的大部分质量控制体系仍然适用于流水线，性能验证方案可参考最新颁布的行业标准。流水线完整的质量保证体系应贯穿检验前、中、后期，包括室内质控、室间质评、性能验证等。

  强有力的LIS支撑是自动化流水线应用于临床， 发挥作用的重要保障。同时，LIS也为深度利用流水线上的检测信息，进一步开发智能化软件提供了可能。

  临床微生物实验室可以根据自身情况，以自动化流水线为支撑，进行多班制和灵活工作时间的安排。其原则为：利用流水线特点，人员轮换处理微生物标本，缩短TAT，使临床获益。

  临床微生物检验必然走向以全自动流水线为代表的自动化时代。应用流水线将促进微生物培养标准化，提高工作效率，并提升工作环境的安全性。全自动流水线是微生物实验室全流程自动化的重要基础架构，进一步与MALDI-TOF MS、自动鉴定药敏仪以及自动染片仪等连接，实现LIS等信息系统互联，临床微生物实验室将迎来全自动化的新时代。

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