实验结果不稳定怎么办?Abcam引领行业新标准,质控抗体 “分子指纹 “,确保结果稳稳当当!

科技   2024-09-12 11:30   上海  


生物物理质量控制(Biophysical QC)可用于检测评估重组抗体的序列一致性、完整性、抗体聚集及纯度,记录每个抗体独一无二的“分子指纹”信息,在制药领域治疗性抗体开发中已有较多应用。


Abcam 作为高质量试剂供应商,率先引入了Biophysical QC用于抗体质量控制,确保抗体的序列一致性、完整性及纯度,保证了不同批次抗体的一次有效,次次可靠。


目前,Abcam已对75%的重组抗体(约32,000个货号)进行了Biophysical QC验证


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据Nature文章报道

抗体是生命科学、医学等研究中重要的生物试剂。大约6000个商业化抗体中不到50%的抗体只识别其对应的靶标,一部分抗体的一致性存在问题2


高引用抗体不等于高可重复性

有的研究工作者通常根据文献引用次数来选择抗体,但仅基于引用次数来挑选抗体存在风险。随着抗体生产和验证技术的不断发展,部分曾被认为特异的抗体被证实还会与其它蛋白交叉反应。如Lukinavicius 等发现,某些 Cdk1 抗体还能识别 Cep152,而且有 200 多篇论文使用了这些抗体3

图1. Abcam 可重复性科学周网络研讨会举例列出了受非特异性抗体影响的论文数量。


攻克可重复性危机是Abcam工作的核心,因此我们不断追求更高的抗体质量,利用重组技术、大量的应用验证及敲除验证来确保抗体特异性、灵敏度和一致性。如今,Abcam采用全新的行业领先标准,即Biophysical QC,在分子水平上确认重组抗体的身份。


Biophysical QC,即生物物理质量控制,可检测评估重组抗体的序列一致性、完整性、抗体聚集及纯度,记录每个抗体的独特分子特征。通俗地说,Biophysical QC可以记录每个抗体的 “分子指纹” 信息。目前这一质控方法已在制药领域治疗性抗体开发中广泛应用。

图2. Biophysical QC在分子水平上确认重组抗体身份


Abcam方法采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)分子排阻高效液相色谱(HPLC-SEC)等技术进行Biophysical QC。

LC-MS

LC-MS 可检测带电颗粒(离子)的完整荷质比 (m/z) ,显示重组抗体重链和轻链的群体及分子量。理想的LC-MS结果将显示重组抗体重链和轻链的分子量大小与抗体氨基酸序列推算的理论分子量相匹配,如图3。

图3. EPR22959-404克隆重组抗体的LC-MS结果


显示抗体重链和轻链的分子量与理论值相匹配。

HPLC-SEC

HPLC-SEC,即分子排阻高效液相色谱。HPLC将抗体及其组分分离以评估纯度,当与SEC联用时,可以排除任何非抗体物质。理想的HPLC-SEC结果将显示抗体单体比例≥90%,如图4。

图4. EPR22959-404克隆完整重组抗体的SEC结果

显示抗体的纯度为99%。


通过对每一批次重组抗体进行Biophysical QC,可确保不同批次的抗体有着完整的、一致的序列,且是无聚集、高纯度的,即保证了不同批次抗体的实验结果高度一致、高特异、高灵敏。

图5. 使用生物物理QC方法对多个批次Recombinant Anti-PRAME antibody (ab216950) 进行批次间一致性检测的结果示例

降低抗体的批次间差异对于长期项目如创新药物研发、诊断/检测试剂开发和延续多年的科研攻关至关重要。经过Biophysical QC的抗体优势在于:


1

可实现不同研发阶段数据结果的可比性

2

可避免对之前所采用的实验参数进行反复重新优化

3

将有信心把不同批次抗体汇总使用,而不是仅使用某个特定批次,从而节省时间经费

Abcam研发高级副总裁Alejandra Solache博士在职业生涯中致力于提高研究抗体的质量和性能。她表示,“我们的使命是帮助科学家加速他们的研究发现,而提供第一次就好用,每次都好用的试剂是实现这一目标的关键”。2021年,她因在应对实验可重复性危机方面的领导和奉献精神而获得了CiteAb颁发的重要个人影响奖。


除Biophysical QC之外,Abcam还通过一系列技术及验证方法来确保抗体一次有效,次次可靠。

重组技术  

实现出色的批次一致性、灵敏度和特异性 

广泛的应用验证

对我们所有的抗体进行标准化验证,如在组织芯片上进行IHC验证 

高级验证

针对特定靶标抗体,对所感兴趣的应用进行验证,包括质谱、ChIC/CUT&RUN和生物活性

敲除验证

使用人敲除细胞系库进行验证,确保特异性,获得2020年和2022年CiteAb奖项


重组抗体是指将抗体基因克隆到高产率表达载体中,并将这些载体转染细胞后表达而获得的抗体。抗体的重组生产避免了基因丢失、基因突变和细胞系漂移等问题,克服了多抗和杂交瘤细胞生产的单抗所面临的特异性和实验可重复性的问题。Abcam精准重组抗体的优势包括:

  • 出色的特异性 - 4,500 多种抗体经过基因敲除验证

  • 批次间一致性高

  • 保证长期供应,可批量生产

  • 灵敏度更高

点击下方视频,了解重组抗体能为您的研究带来哪些好处。


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Abcam一直牢记使命,为全球科研工作者提供高品质抗体。我们不断提高抗体质量标准,采用行业领先的Biophysical QC标准,为解决实验可重复性危机作出贡献。


您在实验中为提高可重复性做出的微小改变,都可能会对人类解决更大的科学/医学难题产生重大影响。无论是确保在应用中正确验证试剂、优化数据分析,还是使用重组抗体,只要同心协力,我们就能化解可重复性危机。


参考文献


1. Baker, M. 1,500 scientists lift the lid on reproducibility. Nature 533, 452-454, doi:10.1038/533452a (2016).

2. Bradbury, A. & Pluckthun, A. Reproducibility: Standardize antibodies used in research. Nature 518, 27-29, doi:10.1038/518027a (2015).

3. Lukinavicius, G., Lavogina, D., Gonczy, P. & Johnsson, K. Commercial Cdk1 antibodies recognize the centrosomal protein Cep152. Biotechniques 55, 111-114, doi:10.2144/000114074 (2013).



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