Biophysical QC，即生物物理质量控制，可用于检测评估重组抗体的序列一致性、完整性、抗体聚集及纯度，记录每个抗体不易获知的独特特征。通俗地说，Biophysical QC可以记录每个抗体的“分子指纹”信息，其在制药领域治疗性抗体开发中已有较多应用。
如今，Abcam 作为高质量试剂供应商，率先引入Biophysical QC用于抗体质量控制。Biophysical QC在分子水平上记录重组抗体的“指纹“信息，保证了不同批次抗体的高一致性、高特异性、高灵敏度。
目前，Abcam已对75%重组兔单克隆抗体（约24000个货号），进行了Biophysical QC。
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据Nature文章报道
而抗体是生命科学、医学等研究中重要的生物试剂。大约6000个商业化抗体中不到50%的抗体只识别其对应的靶标，一部分抗体的一致性存在问题2。
高引用抗体不等于高可重复性
有研究工作者通常会依据文献引用次数来选择抗体，但仅基于引用次数来挑选抗体存在风险。随着抗体生产和验证技术的不断发展，部分曾被认为特异的抗体被证实还会与其它蛋白发生交叉反应。如Lukinavicius 等发现，某些 Cdk1 抗体还能识别 Cep152，而且有 200 多篇论文使用了这些抗体3。
图1. Abcam 可重复性科学周网络研讨会举例列出了受非特异性抗体影响的论文数量。演讲嘉宾：Andrew Bradbury、 Pablo Engel、Peter McPherson 和 Angelo De Marzo。
攻克可重复性危机是Abcam工作的核心，因此我们不断追求更高的抗体质量，利用重组技术、大量的应用验证及敲除验证来确保抗体特异性、灵敏度和一致性。Abcam累计对超过4,500种抗体进行了敲除验证。如今，Abcam采用全新的行业领先标准，即利用Biophysical QC在分子水平上确认重组抗体的身份。
Biophysical QC，即生物物理质量控制，其可检测评估重组抗体的序列一致性、完整性、抗体聚集及纯度，记录每个抗体不易获知的独特特征。通俗地说，Biophysical QC可以记录每个抗体的“分子指纹”信息，其已在制药领域治疗性抗体开发中应用较多。
图2. Biophysical QC在分子水平上确认重组抗体身份
Abcam Biophysical QC方法采用液相色谱-质谱联用（LC-MS）和分子排阻高效液相色谱（HPLC-SEC）等技术。
LC-MS
LC-MS 检测带电颗粒（离子）的完整荷质比 (m/z)，显示已知分子量大小的重组抗体重链和轻链的群体。理想的LC-MS结果将显示重组抗体重链和轻链的分子量大小与表达质粒中重组抗体序列的理论分子量相匹配，如图3。
图3. EPR22959-404克隆重组抗体反卷积质谱
可观察到的抗体重链和轻链的分子量与从质粒序列获得的理论分子量相匹配。
HPLC-SEC
HPLC-SEC，即分子排阻高效液相色谱，HPLC将抗体及其组分分离以评估纯度，当与SEC联用时，可以排除任何非抗体物质。理想的HPLC-SEC结果将显示抗体单体比例≥90%，如图4。
图4. EPR22959-404克隆完整重组抗体的SEC结果图
结果显示99% 的组分为抗体单体。
通过比对每一批次重组抗体Biophysical QC所提供的分子水平上的“指纹“信息，可进一步确保抗体是有着完整的、一致的序列，且是无聚集、高纯度的，即保证了不同批次抗体的高一致性、高特异性、高灵敏度。
减少所用抗体的批次间差对于长期项目至关重要，如创新药物研发、诊断/检测试剂开发、延续多年的科研攻关。其优势在于：
1
可实现不同研发阶段数据结果的可比性
2
可避免对之前所采用的实验参数进行反复重新优化
3
将有信心把不同批次抗体汇总使用，而不是仅使用某个特定批次，从而节省时间经费
“我们的使命是帮助科学家加速他们的研究发现，而提供第一次就好用，每次都好用的试剂是实现这一目标的关键”，Abcam的研发高级副总裁 Solache博士表示。Solache博士在行业和学术界的职业生涯中，致力于提高研究抗体的质量和性能。2021年，她因在应对实验可重复性危机方面的领导和奉献精神而获得了CiteAb颁发的重要个人影响奖。
Abcam抗体的高质量是依赖于一系列可靠的抗体验证方法，而Biophysical QC是在这些抗体验证方法的基础上进行的，其它抗体验证方法包括：
重组技术
实现出色的批次一致性、灵敏度和特异性
广泛的应用验证
对我们所有的抗体进行标准化验证，如在组织芯片上进行IHC验证
高级验证
针对特定靶标抗体，对所感兴趣的应用进行验证，包括质谱、ChIC/CUT&RUN和生物活性
敲除验证
使用人敲除细胞系库进行验证，确保特异性，获得2020年和2022年CiteAb奖项
重组抗体是指通抗体基因克隆到高产率表达载体中，并将这些载体转染细胞后表达而获得的抗体。抗体的重组生产避免了基因丢失、基因突变和细胞系漂移等问题，因而克服了多抗和杂交瘤源单抗面临的特异性和实验可重复性的问题。Abcam精准重组抗体的优势包括：
特异性出色，3,800 多种抗体经过基因敲除验证
批间结果一致
保证长期供应，可批量生产
灵敏度更高
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Abcam一直牢记使命，为全球科研工作者提供高品质抗体。如今，我们不断提高抗体质量标准，采用行业领先的Biophysical QC标准，为解决实验可重复性危机作出贡献。
您在实验中为提高可重复性采取的一些细小改变，都可能会对人类解决更大科学/医学难题产生重大影响。无论是确保在应用中正确验证试剂、优化数据分析，还是改用重组抗体，只要同心协力，我们就能化解可重复性危机。
参考文献
1. Baker, M. 1,500 scientists lift the lid on reproducibility. Nature 533, 452-454, doi:10.1038/533452a (2016).
2. Bradbury, A. & Pluckthun, A. Reproducibility: Standardize antibodies used in research. Nature 518, 27-29, doi:10.1038/518027a (2015).
3. Lukinavicius, G., Lavogina, D., Gonczy, P. & Johnsson, K. Commercial Cdk1 antibodies recognize the centrosomal protein Cep152. Biotechniques 55, 111-114, doi:10.2144/000114074 (2013).
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