DNA凝胶回收试剂盒试剂配方

学术   2024-09-10 08:41   北京  

从凝胶中纯化DNA是DNA片段亚克隆过程中的关键步骤。多年以来已经发表了许多从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA的方法。


目前市场上最主流的试剂盒操作的核心步骤是将DNA结合到硅胶膜表面。含有DNA条带的琼脂糖凝胶块溶解在离散缓冲液(chaotropic buffer)中,这破坏了琼脂糖聚合物之间的氢键。解离的 DNA滞留在硅胶珠或膜上,经水溶液或含有低浓度盐或乙醇的缓冲液回收。


那么这些试剂盒的配方是如何呢?


溶胶液

异硫氰酸胍     3M

乙酸钾            0.375M

PH                  5.0


漂洗液

乙酸钾                           50mM

Na2EDTA·2H2O            83.5uM

PH                                5.0

乙醇                              80%(用时再加)


基础液:用800ml ddH2O溶解4.907g乙酸钾,加入167ul 0.5M Na2EDTA·2H2O(PH8.0)溶液,用冰醋酸调节到PH5.0,加水至1L。过滤除菌。


取200ml基础液,加入800ml乙醇。


洗脱缓冲液TE

1 M Tris-HCl (pH 8.0) 50 ml的配制:称取Tris碱6.06 g,加超纯水40 ml溶解,滴加浓HCl约2.1 ml调pH至8.0,定容至50 ml。


0.5 M EDTA(pH 8.0)50 ml的配制:称取EDTA-Na2·2H2O 9.306 g,加超纯水35 ml,剧烈搅拌,用约1 g NaOH颗粒调pH至8.0,定容至50 ml。(EDTA二钠盐需加入NaOH将pH调至接近8.0时,才会溶解。)


1×TE10 mM Tris-HClpH 8.01 mM EDTApH 8.0)的配制

1 M Tris-HClpH 8.0 

1 ml

0.5 M EDTApH 8.0  

0.2ml

超纯水至        

100 ml

以上为试剂盒溶液配方,还需要吸附DNA的柱子自行购买即可。


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