杨 明1，隋殿军2，孙 红1，于德伟1，崔志勇1 (1.吉林省中医中药研究院中药研究所药理室，吉林长春 130021；2.长春中医学院，吉林长春 130021)
蜂胶是蜜蜂采集植物幼芽中的树脂并混入其上颚腺分泌物及蜂蜡加工而成的天然物质。笔者从蜂 胶中分离纯化出蜂胶总黄酮，总黄酮以白杨素计为51.2%。已证明蜂胶总黄酮对大鼠心肌缺血-再灌注损伤具有明显的保护作用。本实验继续研究其抗心肌缺血作用。
1 材料与方法
1.1 动物：健康成年杂种犬，体重12~16kg，雌雄兼用，由白求恩医科大学实验动物部提供。
1.2 药物：蜂胶总黄酮(含白杨素51.2%)由本院剂型研究室提供。用时以适量水配制。
1.3 仪器：RM-6000型多道生理记录仪，日本光电公司出品。
1.4 模型制备及指标测定：杂种犬20只，随机分为4组，每组5只。以戊巴比妥30mg/kg iv麻醉。背位固定，颈部皮肤切开，气管插管，连接WM一2 型人工呼吸机，分离冠状动脉左前降支下1/3处，穿线以备结扎，造成心肌梗死，用多点湿布式吸附法标测心肌外膜电图(E ECG) ，标测点24个，分正常区(对照点)，梗死边缘区和梗死中心区。术毕，稳定15min，记录各点E ECG，同时自股静脉取血，测天冬氨酸转氨酸(AST) ，肌酸磷酸激酶(CPK) 和乳酸脱氢酶(LDH) 活性，作为给药前值，结扎冠状动脉15min后，食管插管，给药，对照组给予等容量生 理盐水，给药组给予蜂胶总黄酮80、40、20mg/kg。记录给药前及给药后10、20、30、45、60、90、120、 150、180、210、240、300、360minEECG，以ST段升高总mV数表示Z-ST，以ST段升高≥2mV的导联数为N-ST。记录360min后，第2次取血测AST、CPK和LDH活性。最后，取下心脏，称全心质量，沿冠状沟剪去大血管根部和心房，称左心室质量，靠近结扎部位取材，做病理组织学观察。将左心室均匀地横断切成5片，置于硝基四氮唑蓝(N-BT) 染液中，在37℃恒温水浴箱中染色15min。用落点求积法(36点·cm²)测量每片心肌双侧梗塞区(N-BT非染色区与非梗塞区(N-BT染色区)，每片心肌称质量，计算每片心肌面积、心室总面积和梗死区的总面积，计算梗死区与心室及心脏质量百分比。
1.5 统计学处理：实验结果以r土s表示，计量资料 用方差分析法分析，用t检验(双样本等方差假设) 统计处理。
2 结果
2.1 对E ECG的影响
2.1.1 对缺血程度的影响(∑-ST)：在60~240 min观察时间内，蜂胶总黄酮对缺血程度(∑-ST) 具有明显的改善作用。见表1。
2.1.2 对缺血范围(N-ST)的影响：在60~210 min观察时间内蜂胶总黄酮可明显缩小缺血范围(N-ST)。见表2。
2.2 对梗死面积的影响：蜂胶总黄酮可明显减少梗死面积。见表3。
2.3 对心肌酶AST、CPK、LDH活性的影响：蜂胶总黄酮对血清AST、CPK、LDH活性的升高具有明 显的降低作用，且有明显量效关系。见表4。
2.4 心肌损伤的病理组织学观察：将所取标本在 10%中性福尔马林中固定，常规石蜡包埋、切片、 HE染色，光镜观察。结果表明：因动物结扎后存活时间较短，模型组动物未见明显心肌坏死灶，仅有1只动物可见局灶性坏死灶与正常心肌界限清楚，其余动物可见局灶性心肌间质水肿，肌细胞嗜红浓染， 间质水肿明显；蜂胶总黄酮高、中、低剂量组动物心肌损伤与模型组比较明显减轻，其中高剂量组效果 最好。表明蜂胶总黄酮对动物心肌损伤有明显的减轻作用。
3 讨论
结扎犬冠状动脉前降支，阻断其分布区域的心肌供血，心肌细胞因长时间缺血-缺氧而造成不可逆损伤和坏死[2] 。本实验用心肌外膜电图(E ECG) 标测心肌缺血程度和范围，定量组织学测定心肌梗死范围及生化检测心肌梗死后血清酶的变化。实验结果表明，蜂胶总黄酮经口服给药，能明显降低心肌缺血程度(∑-ST)，对缺血程度(∑-ST)在60~240 min作用显著；减少心肌缺血范围(N-ST) ， 对缺血范围(N-ST) 在60~210min作用显著，起效时间 在60min左右， 可持续240min；还可明显缩小心肌梗死范围；急性心肌缺血损伤时，心肌细胞内心肌酶因释放而减少，血清中心肌酶活性则增加，故测定血清中心肌酶活性变化能反映心肌组织损伤情况，从各组心肌酶均值水平来看，蜂胶总黄酮可明显降低血清中AST、CPK、LDH活性，差异显著。HE染色组织形态学观察显示，与对照组比较，蜂胶总黄酮的细胞形态有明显的改善，炎细胞浸润和间质水肿程度均有减轻。提示蜂胶总黄酮具有抗心肌缺血作用。
参考文件：[1] Yang M， Zh uS， SuiD Y， etal.Protective effects of the to- tal flavone s of propolis(TFP) on myocardial ischemic-re per- fused injury in rats[J] .Chin Pharmacol Bull(中国药理学通 报)，2005，21(4)：413-415.
[2] SuiD Y， Chen MQ， Yu XF， etal.Protective effect of gin- seno side-Rb on experimental myocardial infarction in dogs [J] .Chin Tradit Herb Drugs(中草药) ， 2001， 32(2) ：136- 139.
