首页 时事 民生 政务 教育 文化 科技 财富 体娱 健康 情感
更多
旅行 百科 职场 楼市 企业 乐活 学术 汽车 时尚 创业 美食 幽默 美体 文摘

蛋白酶K Proteinase K

健康   科学   2023-06-01 07:15   上海  




蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到。蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力。咨询订购热线：400-021-8158





蛋白酶K应用

  • ◆ 基因诊断试剂盒

  • ◆ 基因组DNA提取试剂盒

  • ◆ RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶

  • ◆ 提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质-譬如DNA疫苗和肝素的制备

  • ◆ 制备脉冲电泳的染色体DNA

  • ◆ 蛋白质印迹


  • *  蛋白酶K的一般工作浓度50-100ug/ml


蛋白酶K指标


品名

蛋白酶 K / Proteinase K

来源

林伯氏白色念球菌（Tritirachium album limber）

外观

白色冻干粉

比活

>30U/mg蛋白

分子量

29,730

CAS No.

39450-01-6

EC No

3.4.21.14

活性单位定义

37℃、pH 7.5条件下，每分钟可水解底物酪蛋白生成1μmol酪氨酸的蛋白酶K的量，定义为一个单位（U）。

DNase残留

以λDNA为底物，37℃消化6小时以上，未检测到脱氧核糖核酸酶活性。

RNase残留

25℃消化16小时以上，未检测到核糖核酸酶活性。

失活方法

反应体系中加入PMSF或DFP抑制剂即可失活，65℃温育10-15min可部分失活

包装

100mg，1g，10g，1kg 大包装询价


蛋白酶K储存

干粉状态可在0~4℃条件下低温保藏。溶解后分装为适当体积，-20℃贮存。运输可在室温下进行。正确的贮存条件下，干粉状态的有效期可达一年。液体状态在-20℃有效期为半年。打开包装使用后，如果在2~8℃环境下放置超过一周时间，建议过滤除菌或增加稳定剂如0.5%叠氮化钠，防止微生物污染。

贮存和稀释缓冲液：50mM Tris-HCl缓冲液,2mM CaCl2 (pH 8.0)。
反应条件：反应缓冲液中37-56℃温育一小时


蛋白酶K实验数据

1. 酶活测定和稳定性试验

(1) 酶活测定

试剂准备

试剂 I - 底物：1%牛奶乳酪蛋白溶液。

1 g牛奶乳酪蛋白溶于50 ml 0.1 M磷酸钠盐溶液，pH 8.0，65-70 ℃水域孵育15 min搅拌溶解，自来水冷却，氢氧化钠调节pH 8.0，定容100 ml。
试剂 II - TCA溶液：0.1 M三氯乙酸，0.2 M乙酸钠，0.3 M乙酸，HCl调节pH 4.03，定容100ml。
试剂 III - 0.4 M碳酸钠溶液。
试剂 IV - 福林酚试剂：用水5倍稀释。
试剂 V - 酶稀释液：0.1 M磷酸钠盐溶液，pH 8.0。
试剂 VI - 酪氨酸溶液：1 μg/ml酪氨酸，0.2 M HCl溶解。

操作步骤

1．0.5 ml试剂I 37 ℃孵育10 min，加入0.5 ml酶液，混匀，37 ℃反应10 min；
2．加入1 ml试剂II终止反应，混匀，继续孵育30 min；
3．离心反应液；
4．取0.5 ml上清液，加入2.5 ml 试剂III，0.5 ml试剂IV，混匀后37 ℃孵育30 min；
5．660 nm 测定OD1；空白对照组：0.5 ml试剂V代替酶液，测定OD2；
6．0.5 ml试剂VI，2.5 ml 试剂III，0.5 ml试剂IV，混匀后37 ℃孵育30 min。660 nm 测定OD3；
空白对照组：0.5 ml 0.2 M HCI代替试剂VI，测值为OD4。

活力计算


公式说明：
2：反应液总体积（mL）；
0.5：酶液体积（mL）；
10：反应时间（min）；
df：稀释倍数；
181.2：酪氨酸分子量；
C：酶浓度( mg/mL)。


结果比较


蛋白酶K特异活性
制造商
国外M品牌
Seebio
冻干产品活性 u/mg
33.5
49.5


(2)纯度和消化蛋白测试（SDS-PAGE）

结果: 蛋白质纯度超过 99% （激光扫描 SDS-PAGE胶）


(3) 稳定性测试：

结论：冻干粉正确储存一年内活性不变；液体酶酶活半年内降低小于5%。


2. 对比试验

以Roche蛋白酶K和seebio蛋白酶K对比。

对比反应条件：roche蛋白酶k 65℃ 10m；Seebio 蛋白酶k 65℃ 10m；Seebio蛋白酶K 55℃ 60m

以下结果QC符合要求。每管均为500ul全血。共3组对照。

实验条件

得率
ROCHE65℃10m
33ug
19.2ug
5ug
SEEBIO65℃10m
30ug
20ug
4.8ug
SEEBIO55℃60m
30.4ug
18.5ug
5.4ug
全血提取DNA试剂盒电泳图
全血提取DNA actin电泳图
日期：2010.06.09
凝胶浓度：0.7％琼脂糖RNA胶
上样量：1ug/孔
电泳条件：U=105V T=15min
1. 090826-15（roche，65℃ 10m）
2. 090826-15（seebio，65℃ 10m）
3. 090826-15（seebio，55℃ 60m）
4. 090826-17（roche，65℃ 10m）
5. 090526-17（seebio，65℃ 10m）
6. 090826-17（seebio，55℃ 60m）
7. 090826-20（roche，65℃ 10m）
8. 090826-20（seebio，65℃ 10m）
9. 090826-20（seebio，55℃ 60m）
日期：2010.06.10
凝胶浓度：0.7％琼脂糖DNA胶
上样量：10ug/孔
电泳条件：U=95V T=15min
1. 090826-15（roche，65℃ 10m）
2. 090826-15（seebio，65℃ 10m）
3. 090826-15（seebio，55℃ 60m）
4. 090826-17（roche， 65℃ 10m）
5. 090526-17（seebio， 65℃ 10m）
6. 090826-17（seebio， 55℃ 60m）
7. 090826-20（roche， 65℃ 10m）
8. 090826-20（seebio， 65℃ 10m）
9. 090826-20（seebio， 55℃ 60m）
－：Negative control
＋：Positive Control

结论：SEEBIO 蛋白酶K与ROCHE蛋白酶k实验结果显示在65℃水浴10m后得率及跑胶图效果基本相同。可替代使用。


蛋白酶K产品列表

货号

品名

包装规格

EBY0027M

蛋白酶K(冻干，水溶）‍

100mg、1g

EBY0027J

蛋白酶K(冻干，甘油溶）

100mg、1g


蛋白酶K参考文献

1. Kraus, E; et.al. Proteinase K from the Mold Tritirachium album limber, Specificity and Mode of Action. Z. Physiol. Chem., 357:939; 1976.
2. Jany,KD, et al. Amino Acid Sequence of Proteinase K from the Mold, Tritirachium album limber. Proteinase K; a Subtilisin-related Enzyme with Disulfide Bonds. FEBS Letter, 199,139.1986.
3. Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Volume 3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, B.16.
4. Sweeney, P.J. and Walker, J.M. (1993) Enzymes of molecular biology. In: Methods in Molecular Biology, Vol. 16, M.M. Burrell, ed., Humana Press, Inc., Totowa, NJ, 305.


西宝生物专业提供蛋白酶K Proteinase K（CAS:39450-01-6)。咨询订购热线：400-021-8158

联系我们


西宝生物科技（上海）股份有限公司，是一家立足生物试剂领域，集研发、生产和服务为一体的“国家高新技术”和国家专精特新“小巨人”企业; 入驻“上海研发公共服务平台”，并荣获“上海市浦东新区知识产权培育企业”称号。始终注重质量和可持续性发展，西宝生物通过了ISO9001质量管理体系，ISO14001环境管理体系和ISO45001职业健康和安全管理体系认证。
公司自2003年成立以来，深耕原料研发，坚持自主创新，持续为诊断试剂、疫苗、抗体蛋白药物生产企业及CRO、CDMO、科研机构等提供研产用试剂原料，专注于IVD的生化诊断、免疫诊断、分子诊断、血液诊断、微生物诊断、POCT和生物制药等领域。Seebio品牌聚焦生物产品技术创新和定制化服务。
请关注西宝生物微信公众号（订阅号 爱西宝资讯；服务号 西宝生物）
或访问以下站点了解更多相关信息：

www.seebio.cn（生物试剂原料）

www.cxbio.com（科学研究领域）

mall.seebio.cn（商城：产品价格体系）

www.allinno.com（国际市场）


点击【在看】
分享给更多需要的人



声明
1、本公众号所发表的内容注明来源的，版权归原出处所有，其观点不能代表本公众号立场。如有侵权请联系编辑微信：13917439331
2、本公众号原创文章，任何媒体、个人、网站如需转载，须在文首位置注明“爱西宝资讯”并注明作者。



 http://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzA4NjA1ODUzMQ==&mid=2652922841&idx=1&sn=ec8f4e10f03a1b59435f0cd953361374
Ai 西宝生物
西宝生物深耕原料研发，坚持自主创新，持续为IVD工业及科研用户提供研发生产用试剂原料，产品覆盖生化诊断、免疫诊断、分子诊断、血液诊断、微生物诊断、POCT等领域。Seebio品牌专注于高品质创新产品的开发及定制化服务。
 最新文章
医美产品配方如何选择合适的表面活性剂？
用于体内抗体药/抗抗体浓度检测的ELISA试剂盒
酒精进入体内的24小时，到底发生了什么？
一网打尽内毒素/细菌/真菌检测 - 细菌内毒素检测（鲎试剂）
修饰性PEG在重组蛋白药物中的应用
疫苗稳定剂——明胶
层析介质在疫苗纯化中的应用
ADC Linker之单分散氨基PEG Linker系列
CHO细胞、HEK293细胞、 Vero细胞培养基产品
大暑起，夏正浓
核苷酸及其衍生物系列
Seebio®优质鲑鱼精DNA
知识产权赋能新质生产力创新发展，西宝生物成为“国家知识产权局上海张江审查员实践基地实践点”
不可不知的化妆品抗衰老成分
脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）检测原理及相关原料
脂肪酶检测用共乳化剂 - 二月桂甘油硫酸酯
脂肪酶测定用高灵敏度底物
深耕微生物培养领域 历经多年验证，西宝生物隆重推出胰蛋白胨+酵母粉王炸组合
从载体构建到蛋白表达-西宝生物蛋白表达一站式服务方案
体外诊断中交联剂的用途与选择
R-藻红蛋白标记链霉亲和素（PE-SA）
仿生肽——功效护肤界的“六边形战士”
传染病类抗原抗体，助力体外诊断研究
甲乙流感病毒(Influenza A & B)抗原检测用原料
美白神器大合集，化妆品原料里的亮肤达人
谷草转氨酶（AST/GOT）检测试剂盒用原辅料
γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）检测试剂盒用原辅料
PEG修饰剂的常见结构及应用
荧光PEG修饰剂
凝血诊断原料和溯源标准品
精彩瞬间|西宝生物2023年CACLP圆满收官 明年再见！
谷丙转氨酶（ALT）检测试剂盒用原辅料
夏日炎炎 当燃不让！诚邀参加CPHI 2023 上海
聚乙二醇修饰剂定制服务
蛋白酶K Proteinase K
异硫氰酸胍 - RNA提取试剂
HEPES生物缓冲液
Jackson ImmunoResearch 常备现货速订
 分类
时事
民生
政务
教育
文化
科技
财富
体娱
健康
情感
旅行
百科
职场
楼市
企业
乐活
学术
汽车
时尚
创业
美食
幽默
美体
文摘
 原创标签
时事 社会 财经 军事 教育 体育 科技 汽车 科学 房产 搞笑 综艺 明星 音乐 动漫 游戏 时尚 健康 旅游 美食 生活 摄影 宠物 职场 育儿 情感 小说 曲艺 文化 历史 三农 文学 娱乐 电影 视频 图片 新闻 宗教 电视剧 纪录片 广告创意 壁纸头像 心灵鸡汤 星座命理 教育培训 艺术文化 金融财经 健康医疗 美妆时尚 餐饮美食 母婴育儿 社会新闻 工业农业 时事政治 星座占卜 幽默笑话 独立短篇 连载作品 文化历史 科技互联网
 发布位置
广东 北京 山东 江苏 河南 浙江 山西 福建 河北 上海 四川 陕西 湖南 安徽 湖北 内蒙古 江西 云南 广西 甘肃 辽宁 黑龙江 贵州 新疆 重庆 吉林 天津 海南 青海 宁夏 西藏 香港 澳门 台湾 美国 加拿大 澳大利亚 日本 新加坡 英国 西班牙 新西兰 韩国 泰国 法国 德国 意大利 缅甸 菲律宾 马来西亚 越南 荷兰 柬埔寨 俄罗斯 巴西 智利 卢森堡 芬兰 瑞典 比利时 瑞士 土耳其 斐济 挪威 朝鲜 尼日利亚 阿根廷 匈牙利 爱尔兰 印度 老挝 葡萄牙 乌克兰 印度尼西亚 哈萨克斯坦 塔吉克斯坦 希腊 南非 蒙古 奥地利 肯尼亚 加纳 丹麦 津巴布韦 埃及 坦桑尼亚 捷克 阿联酋 安哥拉