PIWI 相互作用 RNA （piRNA） 通路指导雄性小鼠种系发育过程中年轻、活跃转座子的 DNA 甲基化1.piRNA 将 PIWI 蛋白 MIWI2 （PIWIL4） 拴在新生的转座子转录物上，导致 DNA 通过 SPOCD1 甲基化.转座子甲基化需要非常精确：每个拷贝都需要甲基化，但必须避免脱靶甲基化。但是，确保这种精度的底层机制仍然未知。在这里，我们表明 SPOCD1 直接与 SPIN1 （SPINDLIN1） 相互作用，SPIN1 是一种主要与 H3K4me3-K9me3 结合的染色质读取器.普遍的假设是 piRNA 导向的 DNA 甲基化所需的所有分子事件都发生在 MIWI2 整合之后。我们发现 SPIN1 的表达先于 SPOCD1 和 MIWI2 的表达。
接下来，我们试图确定 SPOCD1 的哪一部分需要与 SPIN1 相关联。为此，我们在 HEK 细胞中将 SPOCD1 或其片段与 SPIN1 共表达，并测试了它们的相互作用能力。全长 SPOCD1 和氨基末端 1-409 个氨基酸（片段 1）共沉淀 SPIN1（图 1）。相互作用进一步定位到氨基酸 205-409（片段 1b）（图 D）。通过从 SPOCD1 的相互作用片段中依次删除 10-20 个氨基酸的片段，我们将 SPIN1 结合区域定位到 20 个氨基酸 （328-347）（图 D）。AlphaFold2 模型预测 SPOCD1 的这些氨基酸折叠成 β 22,23
这些观察结果表明 SPOCD1 向染色质的募集与 MIWI2 无关。SPOCD1 不包含任何已知的染色质结合结构域，因此我们检查了来自 E16.5 胎儿睾丸的 SPOCD1 免疫沉淀质谱 （IP-MS） 数据中的染色质结合蛋白，发现 SPIN1 是一种高度富集、高置信度的相关蛋白4（图 .SPIN1 是一种染色质读取器，包含三个 Tudor 样结构域 （TLD1-3）。它是一种高亲和力 H3K4me3 读取器，TLD2 可识别这种转录相关染色质标记.TLD1 结合异染色质相关的 H3K9me3 ，并且这种相互作用增加了 SPIN1 染色质结合的整体亲和力6.TLD3 不含芳香族笼，可介导与其他蛋白的相互作用6.Miwi2 缺陷不会影响 E16.5 胎儿淋动细胞中的 SPIN1 核定位
