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01
总氮，总氮，简称为TN，总氮的定义是水中各种形态无机和有机氮的总量。包括NO3-、NO2-和NH4+等无机氮和蛋白质、氨基酸和有机胺等有机氮。
6.有机氮，是指与碳结合的含氮物质的总称。微生物发酵常用的有机氮源包括玉米浆，蛋白胨，酵母提取物，豆粕，氨基酸，尿素等。有机氮由氨基酸组成，根据水解程度可以分为：蛋白、胨、肽、氨基酸。发酵工业一般采取具有一定水解程度的胨作为氮源。
蛋白䏡：䏡蛋白胨又称朊间质蛋白胨，又叫蛋白胨,与普通蛋白胨的区别是其含有1%～2%的能被硫酸铵所沉淀的䏡氮。䏡蛋白胨是一种特殊的高营养的蛋白胨，富含高分子量的肽。
蛋白胨：是蛋白质分解产物，如将牛肉、酪蛋白、牛奶粉、白明胶、大豆蛋白、丝蛋白、血纤维蛋白等为原料，经不完全的水解工艺所得的产物。市售产品以淡黄至棕黄色粉剂为主。其平均分子量介于䏡和肽之间，约2000左右。
肽：一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基可以缩合成肽，形成的酰胺基在蛋白质化学中称为肽键。肽又可以分为2肽，寡肽，多肽等。
02
在科研工作中需要测定蛋白含量，总氮含量以及氨氮含量。科研工作者也建立了各种各样的氮含量的测定方法，但是由于其检测原理的不同，其适用范围也不一样，具体见下表：
方法 | 灵敏度 | 时间 | 原理 | 优缺点 | 适用范围 |
凯氏定氮法（Kjedahl法） | 灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为 ±2％ | 费时 8～10小时 | 将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定 | 干扰较少，非蛋白氮会干扰有机氮的测定（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离） | 用于标准蛋白质含量的准确测定；凯氏定氮法被国内外视为蛋白质含量的标准检验方法，可作为衡量其他蛋白质含量检测方法准确性的标准。干扰少；费时太长，不可测硝肽氮。 |
双缩脲法（Biuret法） | 灵敏度低1～20mg | 中速 20~30分钟 | 多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物 | 干扰少，灵敏度低。 | 凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。适用于快速氮不准确的蛋白含量测定。 |
紫外吸收法 | 较为灵敏50～100mg | 快速 5～10分钟 | 蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共扼双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处，其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比。此外，蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系，进行蛋白质含量的测定。 | 受各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸的干扰 | 适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。 |
Folin－酚试剂法（Lowry法） | 灵敏度高～5mg | 慢速 40～60分钟 | 双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原 | 受硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇的干扰。耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化 | 同双缩脲法 |
考马斯亮蓝法(Bradford法) | 1～5mg | 快速5～15分钟 | 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm | 强碱性缓冲液；TritonX-100;SDS | 游离氨基酸、肽和低分子量蛋白质不会与考马斯染料试剂产生颜色。一般情况下，肽或蛋白质的质量必须大于 3,000 道尔顿才能被该试剂检出。在某些应用中，这是一个优点。 |
BCA法 | 0.5-20μg/mL | BCA法基于双缩脲原理，碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，BCA鳌合Cu+作为显色剂，产生蓝紫色并在562nm有吸收峰，单价Cu+与蛋白质呈剂量相关性。 | 不易受一般浓度去污剂的干扰；抗干扰能力强。可受螯合剂，高浓度还原剂的影响。 | 单个氨基酸和二肽在双缩脲反应中不受影响，但三肽以及更大的多肽或蛋白质会发生反应，产生吸收峰位于 540 nm 的淡蓝色至篮紫色复合物。一个二价铜离子与附近四到六个多肽结合形成有色螯合物。产生的颜色强度与参与反应的肽键数目成正比。 | |
杜马斯定氮 | 3-5min | 样品在高纯氧中充分燃烧的过程中，将氮元素转化为氮气或氮氧化物，再经过高温铜的还原，使所有的氮转化为 N 2 ，然后利用热导检测器检测 N 2 的含量来推算样品中氮含量。因此杜马斯定氮法也称为杜马斯燃烧法或燃烧定氮法。 | 快速，简洁 | 杜马斯燃烧法既能将有机氮转化为N2 ,又能将无机的硝态氮转化为 N 2。 国家标准GB5009.5-2016中规定 杜马斯定氮法仅适用于蛋白质大于10g/100g的固体样品。 | |
| 其他方法 | 纳氏试剂分光光度法可用于测氨氮。甲醛滴定法测定氨基氮和氨氮。 | ||||
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