而保存在溶液状态,潜在的危害因素将会增多。比如很简单的一个方面,pH值或者缓冲溶液的改变就能够使蛋白在溶液中的稳定性明显不同。使某种溶液状态稳定的方法并不一定就对另一种溶液有效。在生产过程中的其他因素也有可能影响产品的性能。这些因素包括原料来源、稀释和定时错误、温湿度不合适、曝光和容器材料等。为了保证诊断检测的有效期和精确性,这些原料蛋白必须保持稳定和有效。影响蛋白稳定的因数有哪些呢,下面从三个方面介绍给大家,希望能帮助到大家!
1、固态试剂稳定性影响因素
尽管大多数蛋白质在溶液状态的自然构象下发挥作用,但干燥或者冷冻状态仍然是稳定保存的首选。在这些相对稳定的状态下,诸如蛋白酶、氧化剂等有负作用的溶剂与蛋白质的频繁碰撞将会得到最大限度的减少。但是通过干燥或者其他相变方式,比如沉淀和冷冻,将溶剂从蛋白分子中去除,将可能损害蛋白质的功能构造。这些相变可能使通常折叠在分子内部的疏水氨基酸暴露在分子表面,从而造成蛋白质分子通过疏水表面与其他分子结合,导至蛋白质分子的变性。干燥的方式包括自然风干或者冷冻干燥,例如试剂瓶中结合物的干燥、塑料板或者膜材料上包被抗体的干燥。
在要干燥的溶液中加入适当的溶质来防止蛋白质变性是一种非常有效的保持蛋白质稳定的方法。这些溶质的特点是都具有亲水基团,这些基团通过掩盖疏水性氨基酸从而达到稳定蛋白质功能构造的作用。因此,由于在干燥时溶剂的去除会促进蛋白与蛋白,尤其是蛋白与固相表面的相互作用,所以在干燥前加入保护剂非常重要。
无论是干燥方法还是保存条件,想要保持稳定都有很苛刻的要求。当蛋白应用到膜上时,通常要求非常快速的干燥或者冻干,以保持蛋白最佳性能和活力。而对于平板、试管或者微珠的蛋白包被来说,相对于快速干燥,确保组分的彻底干燥则更为重要。为了得到最大限度的有效期,所有干燥后的产品都需要保存在放有干燥剂的密闭容器中。
2、液态试剂稳定性影响因素
虽然抗体、抗原、酶以及其他诊断用蛋白在水溶液中处于天然的机能状态,但这并不是它们最稳定的状态。在溶液中,有众多的因素影响着蛋白的活性功能:
1)蛋白质分子变得更加柔韧易折,从而倾向于改变构象。
2)蛋白质分子和其他分子以及容器壁的碰撞频率增加了。
3)微生物污染的可能性增加了。
4)对温度升高和蛋白浓度降低造成的影响更加敏感。
5)蛋白质更易被氧化。
通常来说,溶解的蛋白质分子在较低的温度和较高的蛋白浓度下最为稳定。在刚好高于冰点的时候,蛋白质分子拥有较少的动能,而这些动能是蛋白质“摆脱”其能量最低的功能构造所必需的。在溶液中,部分蛋白活性的损失是由容器壁的吸附、寡聚酶的解聚以及氧化剂、水解酶、微生物等痕量污染物对蛋白质的灭活等原因造成的,而在越高的蛋白浓度下(毫克每毫升范围或更高),损失的蛋白活性占蛋白总活性的比例也就越低。
3、影响试剂稳定性的其他因素
蛋白来源、纯化方式以及化学偶联的方法都能影响蛋白试剂的活性和稳定性。例如,碱性磷酸酶的来源就对复合物的稳定性有重大影响;就溶液的稳定保存而言,将所需蛋白与对蛋白有伤害作用的酶(如水解酶、氧化酶)从原料中分离是非常重要的。若要保证溶液稳定,就必须去除或者灭活这些有害酶以及能产生这些酶的微生物。在合成复合物时,大量的化学反应步骤已被证明能使酶和抗体分子之间形成共价键。其中的一些方法对某些酶-抗体复合物的稳定负面影响较低。如果一种酶联复合物丧失了酶联检测的活性但仍保持有酶活力,那么另外选择一种化学偶联方法也许能解决这个稳定性问题。
有时候,被认为是稳定性方面的问题实际上是由其他变数造成的蛋白量不足。也许就是一个很明显的稀释错误。生产商必须弃用那些有可能吸收蛋白或者抑制蛋白活性的容器材料,例如未处理的聚苯乙烯、聚砜、聚碳酸酯或者玻璃。聚乙烯和聚丙烯是比较可取的容器材料。有色酶和其他含有氧化金属离子的蛋白溶液不能暴露在阳光下。今天就介绍在这里,文章中的内容仅供参考,如果对您有所帮助还望点赞、转发+关注,我们下期不见不散!
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