亮点文章 | 促进水稻铁素吸收的野生稻内生细菌优良菌株的筛选与鉴定

文摘   科学   2024-10-03 16:14   北京  

促进水稻铁素吸收的野生稻内生细菌优良菌株的筛选与鉴定

李庆懋,彭聪归,齐笑含,刘兴蕾,李臻园,李沁妍,黄立钰

DOI:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2024-0178


植物在生长发育过程中需不断从外界吸取一些必要的矿质营养元素,才能保证正常的生长发育。在各种矿质营养元素中,铁元素在作物生长中发挥着重要的作用。铁在地壳中的储存量位于矿质元素第四位,但由于其存在形式的多样性,能够被植物吸收用于生长发育的有效态铁(Fe2+)含量却很低。受气候变化的影响、全球降雨量减少以及淡水资源骤减,据估测农业用水量到2050年会翻倍,淡水供应量却将下降至50%,导致农业用水更为紧缺。有研究发现,水田变为旱地后,土壤中有效态铁(Fe2+)含量大幅下降。同时在降水少,蒸发强的地区极易形成盐碱地,而在碱性土壤中铁主要以不溶性的氧化铁和氢氧化铁的形式存在,这直接影响到植物对铁元素的摄入,导致植物缺铁。植物缺铁会导致叶绿素合成受阻,光合效率降低,新叶失绿变黄,进而植株生长受到抑制。

植物在长期的进化过程中,为了保证其正常生长发育,形成了缺铁响应机制来调控铁吸收,其中机制I是将Fe3+还原成Fe2+,通过吸收Fe2+为植物提供铁元素;机制II是通过释放铁载体(siderophores)螯合Fe3+进行铁吸收。与大多数禾本科植物不同,水稻长期生长在淹水环境中,土壤偏酸具有很好的还原条件,Fe2+相对充足,为了更高效地吸收铁,除了利用Mas螯合Fe3+吸收铁供给机体利用外,水稻还进化出了针对Fe2+的铁吸收机制(机制 I),即利用Fe2+转运蛋白OsIRT1和OsIRT2直接吸收土壤中的Fe2+。干旱、盐碱地等环境中,土壤pH值较高,铁元素主要以Fe3+形式存在,可溶性极低,难以被水稻利用,这时水稻主要以机制II调控Fe3+的吸收。如何提高水稻在缺铁环境下的铁吸收能力,是水稻生产和扩大水稻适应性面临的实际问题。

目前研究发现,植物铁载体受体蛋白能识别某些微生物分泌的铁载体,这类微生物铁载体可以作为铁螯合剂被植物所利用,促进植物铁吸收。植物内生菌存在于健康植物组织和器官内(包括真菌、细菌、放线菌等),与植物高度共生,具有调节和促进寄主植物生长发育和生理代谢的作用。其中,植物内生细菌具有丰富的嗜铁细菌资源其通过分泌铁载体影响环境中的铁、锌等金属离子迁移,从而促进寄主的铁吸收。目前已知的微生物源铁载体大约有500种。然而,可被水稻高效利用的绿色稳定的微生物源铁螯合剂还较少。

近日,《生物技术通报》在线发表了题为《促进水稻铁素吸收的野生稻内生细菌优良菌株的筛选与鉴定》的研究报告。本研究从4种野生稻内生细菌中进行产铁载体的菌株筛选和鉴定,进一步评估和比较不同属细菌在促进水稻铁吸收的效果,为水稻抗缺铁胁迫研究提供新视角,为研发微生物铁肥提供菌种资源。

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本文主要包括以下几部分内容:    
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 产铁载体细菌的筛选
2.2 高效产铁载体细菌的分子序列鉴定和分类
2.3 高效产铁载体菌株对水稻生长和铁吸收的促进效果分析
2.4 浸菌处理对osbhlh156突变体表型恢复的影响
3 讨论
4 结论




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铁载体是微生物在胞内低铁浓度下分泌的螯合铁的物质,嗜铁细菌的来源广泛,可以从植物根际、土壤、海洋、人体、动物、植物体内等获得。嗜铁内生细菌能直接促进植物生长;能增进宿主植物对氮、磷等营养元素的吸收 ;还能增强植物抗逆性、抗病虫害。在现代农业实践中,利用内生菌调控宿主植物的生长发育是一种新型重要手段,也是一种对环境更友好的方法。来源于植物体内的嗜铁细菌与宿主植物在长期自然选择、协同进化的过程中,形成了稳定的共生关系。相对于其他来源的菌种资源,野生稻内生细菌和栽培稻之间存在着一定的相互作用,基因型可能互相作用于宿主植物和内生细菌之间,影响内生细菌定居的种类和数量。据已有报道,来源于野生稻的内生细菌,在水稻中具有显著促生效果。目前已报道嗜铁细菌对很多植物的铁吸收都有促进作用,这可能是植物的铁载体受体蛋白识别并利用某些微生物产生的铁载体,形成了植物 - 产铁载体微生物间的共生促进作用。


本文对来源于4种野生稻的内生菌进行产铁载体能力定性和定量分析发现,多数内生细菌都能产生铁载体,与已报道研究结论相符。来自不同种属的功能菌株所产铁载体被证明可以被植物利用。但不同菌株促进水稻吸收铁的能力不同,本研究通过分离鉴定高效产铁载体内生菌,其中(类)芽孢杆菌属、假单胞菌属、考氏科萨克氏菌属3种菌类促进铁吸收效果明显。


本研究初步筛选出的18株产铁载体菌株群体中大部分菌株都有促生功能。一方面可能是由于这些内生菌株通过解磷、固氮等功能促进植物营养吸收或直接产生植物激素促进植株生长;另一方面可能是植株感知内生菌产生的铁载体,通过YSL转运蛋白吸收共生体微环境中Fe3+-PS螯合物。在这个过程中,内生菌产生足够的铁载体螯合环境中的Fe3+,而水稻自身合成的铁载体量减少,最终降低水稻铁载体合成所需的能量,而节约的能量可被用于维持水稻的生长。铁参与植物叶绿素的合成,植物体内铁的含量与叶绿素的含量呈正相关。本研究发现18株不同种属的高产铁载体菌株处理水稻后显著提升了水稻的叶绿素含量,候选菌株促进铁含量、叶绿素含量的提升效果与产铁载体能力变化呈现正相关。将菌株产铁载体能力与促生功能结合,从18株菌株中选出了5株最优的高效产铁载体菌株


尽管有大量产铁载体内生菌促进植物的研究,并且证明了嗜铁细菌能够促进宿主对铁的吸收,但关于内生菌产生的铁载体直接被植物机制II利用来促进铁素吸收的研究很少水稻同时具有吸收铁的两种机制,在长期淹水的酸性土壤中,主要通过OsIRT1/2(机制I)转运蛋白吸收游离态Fe2+;游离态Fe2+不足时,启动机制II途径分泌铁载体螯合Fe3+进行铁素吸收。OsbHLH156是位于铁吸收机制II上游的转录调控因子,对水稻分泌铁载体起重要作用。osbhlh156突变导致水稻铁载体麦根酸(mugineic acid, MA)不能正常产生,阻断了机理II铁吸收通路,影响水稻正常铁吸收,表现出严重失绿表型。通过将产铁载体菌株处理osbhlh156突变体后弥补了突变体分泌铁载体的缺陷,促进了植株对铁素的吸收,提高了叶绿素含量,使其失绿症状有所缓解。进一步直接证明了内生菌菌株所产的铁载体可以与水稻共用,螯合了Fe3+供水稻吸收利用,为开发生物菌肥提供菌种资源和理论参考。














从198株菌株中筛选出了5株高效促进水稻吸收铁的产铁载体菌株,并首次将产铁载体菌株运用到分泌铁载体缺陷的水稻突变体材料中,其失绿症状缓解,提高了其体内叶绿素和铁的含量,明确了植物互作微生物所产的铁载体可以被水稻通过机理II吸收利用,可为水稻 - 微生物互作促进水稻铁吸收提供菌种资源和理论依据。












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