【无需离心+超螺旋比例更高】无内毒素质粒提取也能这么卷?

文摘   2024-10-15 16:43   上海  



细胞转染技术在生命科学研究中具有广泛的应用,例如基因治疗、基因表达研究和药物开发等。


通过转染,可以实现基因编辑、蛋白质表达、信号传导研究等,为揭示细胞机制、开发新药和治疗疾病提供了重要工具。


质粒纯化是基因治疗上游研发过程中的重要环节。然而质粒提取过程中常会伴有内毒素的出现,内毒素水平会直接影响后续的细胞转染。



内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖和蛋白复合物,当细菌裂解时会大量释放出来。


内毒素单位为EU。 质粒中内毒素含量的高低常用EU/µg表示。按照EU/µg大小,质粒被分为三个级别:


测序级别(>50EU/µg)

转染级别(<50EU/µg)

无内毒素级别(<0.1EU/µg)


由于内毒素两亲性和负电荷性,性质和DNA类似,因此在质粒纯化过程中会伴随质粒一同被纯化出来。


(图源网络)


内毒素的存在会极大程度的影响转染效率,同时还可能激活免疫细胞的非特异反应,造成假阳性因此,为了保证高转染率和转染细胞高存活率,必须从质粒制备的过程中将内毒素去除




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NucleoBond® Xtra 

Midi/Maxi EF


来自有着近百年滤纸技术和近60年色谱技术的德国MN(MACHEREY-NAGEL),采用二代阴离子交换树脂技术和裂解液澄清方式相结合,质粒质量更高!


重力过滤和过柱,无需离心,减少离心力对质粒超螺旋结构的影响!

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推荐理由1:

内毒素低于0.1EU/ug DNA

NucleoBond® Endotoxin Free Plasmid DNA kit系列设计有专门的Endo-EF内毒素去除试剂,有效去除内毒素,避免了长时间的氯化铯超速离心步骤,无需冰上孵育30min,内毒素含量更低。




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滤纸和色谱技术相结合诞生的NucleoBond® Xtra Column实现裂解液重力过滤和过柱,无需离心,减少了离心力对质粒超螺旋结构的影响。


(裂解后的质粒状态(泳道1)和洗脱下来的质粒状态(泳道4)保持一致。)



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抽提速度更快

NucleoBond® Xtra Column实现过滤以及质粒结合树脂合二为一,避免较长时间的离心。

搭配NucleoBond® Finalizer,仅需5min即可完成之前长达1h的异丙醇质粒离心沉淀操作。


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对内毒素敏感型真核细胞的

高效转染实例!




Huh-7细胞使用某竞品转染试剂进行转染。NucleoBond® Xtra Midi EF抽取的质粒转染后的细胞活力和对照组(treatment w/o DNA)转染后的细胞活力相同。


因此, NucleoBond® Xtra Midi EF kit试剂盒提取的质粒不影响细胞活力。相反,普通分子级质粒抽提试剂盒提取的质粒可以引起细胞活力的降低。





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