Cyto-Mine® Chroma微流控单细胞分析筛选系统
高通量微流控单细胞分析筛选系统Cyto-Mine®自发布之初，旨在利用微流控技术可在大量细胞样品中发现罕见和有价值的细胞，有效加快抗体发现和细胞系开发的流程。随着需求升级，为了满足更多的筛选实验应用需求，英国Sphere Fluidics公司开发了新一代Cyto-Mine® Chroma微流控单细胞分析筛选平台，新平台将单根激光器扩展升级至最多4根激光器，大大拓展了荧光检测实验类型，为抗体发现的assay有了更多的拓展！
Cyto-Mine® Chroma重磅升级来了！
Cyto-Mine® Chroma
Cyto-Mine® Chroma可大大加快AbD和CLD流程：
升级到4根激光器；
支持细胞孵育长达72小时；
单次试验可基于细胞表面标记物、活力和分泌抗体滴度等多因素进行细胞分选，直接获取高活性、高产、高纯度的细胞系；
结合再注射的流程，便于进行复杂的分析，如在单个液滴中包裹多种细胞类型(对于评估结合、细胞毒性分析和推进抗体开发至关重要)。
图1. Cyto-Mine® Chroma可以根据DNA整合效率、活性和滴度分离克隆。
Cyto-Mine® Chroma工作流程
平台集成了单细胞包裹、荧光信号检测、分选“靶标”、成像验证单克隆源性、及单细胞分配至微孔板的几大模块，兼顾高通量和高度自动化。
Cyto-Mine® Chroma支持更加复杂的试验
举例：更有效、直观的筛选抗TNF -α的高产细胞
基于不同荧光标记区别不同类型的细胞，基于抗体特异型的FRET信号检测识别分泌特定抗体的细胞，并根据信号产生快慢和强弱可区分高产和非高产细胞，实现更直接、高效的筛选。
如图2，A型和B型杂交瘤分别标记不同的CellTracker，设计FRET信号探针对特异型识别抗TNF-α的IgG+，最终试验目的是筛选高产抗TNF-α的IgG+的杂交瘤细胞。
图2. 示例。A型杂交瘤：用CellTracker Blue标记，产无关IgG。B型杂交瘤：用CellTracker Deep Red标记，产抗TNF-抗体。
如图3，不同的细胞标记可以轻松识别出两个不同类型的杂交瘤细胞，加上基于抗体特异性圈出所需的“高产”FRET信号，那么就可以基于圈出来的“高产”信号进一步区分细胞类型，最终可以看到“高产”抗TNF-α的IgG+来自B型杂交瘤细胞，阳性率为79.7%。
图3. 使用Cyto-Mine® Chroma检测和分离产生抗TNF -α的单细胞(重组TNF -α用于抗原特异性FRET试验)。
综上所述：
微滴中执行多个检测试验显著改善了高产克隆的选择过程。
一次就可以完成细胞活力、生产力和抗原特异性检测。
支持更多应用：如分析作用机制，每个微滴包裹多个细胞，在微滴中评估未标记细胞存在时标记细胞的功能。
Cyto-Mine® Chroma扩展应用：再注射
生成的微滴下机培养后可以重新注射到Cyto-Mine® Chroma中运行分选分配等操作。相关应用包括：①需要在液滴中长时间孵育细胞的应用；②在液滴生成过程中需要大量操作的应用。
基Cyto-Mine® Chroma生成的微滴在很长一段时间内是稳定的，在37℃，5% CO2下孵育48小时后仍支持重新注入到Cyto-Mine® Chroma中。数据显示，长时间的孵育期不影响液滴的稳定性（图4）。
图4. 示例。A) 0、24和48小时时间点的显微图像。B)在FRET探针存在下，将含有小鼠IgG（4种不同浓度）的液滴重新注射到Cyto-Mine® Chroma中。
参考资料：
1. Kaplon et. al., Antibodies to watch in 2022, Mabs, 2022.
2. Bauer et. al., How can we discover developable antibody-based biotherapeutics? , Front Mol Biosci, 2023.
3. Farid et. al., Benchmarking biopharmaceutical process development and manufacturing cost contributions to R&D, MAbs, 2020.
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