依赖连接反应的诊断利器——高保真Taq DNA连接酶

文摘   科学   2024-07-09 21:30   江苏  



YUGONG
依赖连接反应的诊断利器高保真Taq DNA 连接酶

生/物/医/学/工/具/酶/与/原/料/蛋/白






提到DNA连接酶,大家第一反应都是T4 DNA连接酶(参见探秘T4连接酶:基因的“分子缝合针”)。但其实DNA连接酶还有很多类型,分别针对不同的DNA模板,发挥不同的作用。今天,我们就来了解另一种重要的DNA连接酶——高保真Taq DNA连接酶。
Taq DNA连接酶来源于嗜热菌,以NAD为辅助因子,主要功能是连接DNA双链上切刻(nicking)缺口,而不是双链之间的缺口,因此Taq DNA连接酶不是T4 DNA连接酶的替代品。Taq DNA连接酶要求切刻两侧的两条DNA链与互补靶DNA链完全配对,且切刻缺口上不能有缺失的碱基。连接产物可以通过毛细管电泳、荧光定量PCR或高通量测序等手段来进行分析。Taq DNA连接酶尤其适用于依赖于缺刻连接的分子诊断反应,例如连接酶检测反应(LDR)、多重连接依赖式探针扩增(MLPA)等。


但是,普通Taq DNA连接酶的保真度有限。当缺口处存在错配的情况下,普通Taq DNA连接酶的连接效率仍然偏高,容易出现假阳性结果。为了解决这个问题,愚公生物通过突变改造,获得了高保真的HiFi Taq DNA Ligase,大幅降低了错配的连接率。

每行为不同的单链底物,每列为缺口连接处序列不同的探针。分别用HiFi Taq DNA Ligase和普通Taq DNA Ligase在55℃下反应30 min后检测连接产物。结果表明,当连接处存在错配时,HiFi Taq DNA Ligase的连接效率显著低于普通Taq DNA Ligase,表明HiFi Taq DNA Ligase的保真度更高。


与进口高保真Taq DNA连接酶相比,愚公HiFi Taq DNA Ligase的保真度也不遑多让。采用类似的方法检测,愚公HiFi Taq DNA Ligase在大多数错配位点上的表现都优于进口产品。


真实用户反馈

多重连接依赖式探针扩增(Multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)是2002年出现的一种中通量的分子诊断技术,可以同时检测数十个基因组DNA位点的拷贝数目变化(CNV)或单核苷酸多态性(SNP),其检测尺度可以从单碱基到整条染色体,还可以用于检测DNA甲基化。因此,MLPA被广泛应用于遗传学研究和临床诊断领域,其中的核心工具酶就是高保真DNA连接酶。

有客户详细对比了多种高保真Taq DNA连接酶在MLPA检测中的实际表现,愚公HiFi Taq DNA Ligase的综合性能显著优于某进口产品。

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秉承愚公移山的精神,愚公生物在国内首次实现了限制性内切酶的规模化生产。现拥有限制酶、PCR、等温扩增、逆转录、荧光定量PCR、修饰克隆、体外转录、速溶颗粒等10个系列上百种产品,进入多家行业龙头企业的供应链。



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