4.2.3.1 α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以水-甲醇(93:7)为流动相;以示差折光检测器测定，检测器温度40℃。取阿尔法环糊精对照品、倍他环糊精对照品与伽马环糊精对照品适量，精密称定，用水溶解并定量稀释制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为系统适用性溶液。精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图，伽马环糊精和阿尔法环糊精的分离度应不低于1.5;理论板数按阿尔法环糊精、倍他环糊精、伽马环糊精计算均不低于1500。
测定法 取本品约250mg，精密称定，置25ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀。精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图;另取阿尔法环糊精对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
羟丙基β-环糊精的含量根据其测定机理有几种不同的测定方法：
（1）衍生测定 羟丙基β-环糊精（简称HP-β-CD）是β-环糊精（β-CD）的部分羟基被取代的产物，因此可以参考药典方法，检测其中的取代度，由于HP-β-CD是混合物，因此测定的结果是HP-β-CD中所有的羟丙氧基的含量。根据药典的方法，采用气相色谱法采用羟丙氧基含量。其测定机理在于产品中的羟丙氧基与氢碘酸反应生成2-碘丙烷，然后采用气相色谱法使用内标法测定，具体测定方法如下：
色谱条件与系统适用性试验用25%苯基-75%甲基聚硅氧烷为固定液，涂布浓度为20%的填充柱，或用6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷(或极性相近的固定液)为固定液的毛细管色谱柱;起始温度为100℃，维持8分钟，再以每分钟50℃的速率升温至230℃，维持2分钟;进样口温度为200℃;检测器[氢火焰离子化检测器(FID)或热导检测器(TCD) ]温度为250℃。理论板数按正辛烷峰计算不低于1500(填充柱)或10 000(毛细管柱)，对照品峰与内标物质峰的分离度应符合要求。取对照品溶液1μl注入气相色谱仪，连续进样5次，计算校正因子，相对标准偏差应不大于3.0%。
测定法 取供试品约65mg，精密称定，置已称重的反应瓶中(可取10ml的顶空进样瓶)，加己二酸80mg，精密加入内标溶液(取正辛烷0.5g，置100ml量瓶中，加邻二甲苯溶解并稀释至刻度，摇匀，即得)与57%氢碘酸溶液各2ml，密封，精密称定，于130~150℃振荡60分钟，或在130~150℃加热30分钟后，剧烈振摇5分钟，继续在130~150℃加热30分钟，冷却，精密称定，若减失重量小于反应瓶中内容物的0.50%，且无渗漏，可直接取混合液的上层液体作为供试品溶液;若减失重量大于反应瓶中内容物的0.50%，则应按上法重新制备供试品溶液。
另取己二酸80mg，置已称重的反应瓶中，精密加入内标溶液与57%氢碘酸溶液各2ml，密封，精密称定，根据供试品中所含甲氧基、乙氧基和羟丙氧基的量，用注射器穿刺加入相应的碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷对照品，精密称定，两次称重结果相减即为对照品的加入量。振摇约30秒，静置，取上层液体作为对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液各1μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算，并将结果乘以系数[2-碘丙烷(分子量169.99)转换为羟丙氧基(分子量75.09)系数为0.4417]，即得。
实验过程中应当注意到以下几点：①若条件许可，可以采用顶空法进样，可以减少对衬管和色谱柱的污染，根据2-碘丙烷沸点89.5℃，邻二甲苯的沸点143~145℃，建议顶空温度为80~140℃；②该方法中所使用反应瓶的密封性必须良好，加热和振摇反应前后的减失重量不得超过内容物重量的0.5％，如果超过 0.5%，说明反应生成的 2-碘丙烷已挥发，建议同时制备多份，避免意外；③加热振荡步骤中，有条件的话，建议在加热的同时振摇，以加快反应，同时应注意振摇的幅度，避免太剧烈，溅到瓶盖上；④氢碘酸应尽量使用新开封的，否则测定结果可能受影响，2-碘丙烷建议也使用新开封的；⑤ 衍生试剂中的80mg己二酸是保护羟基的，足够保护65mg的HP-β-CD中的羟基，氢碘酸才是真正的衍生试剂；若反应的程度不完全，可以考虑酌情增加衍生试剂的当量，具体需要考察；⑥本法测定结果的羟丙氧基含量，是一个范围值（19.6~26.3%），需要折算回HP-β-CD干品含量，同时由于不同厂家HP-β-CD中的水分含量不同（＜6%），折回HP-β-CD的含量，可能会有较大的范围内波动，因此数据仅供参考借鉴。
（2）直接测定 根据空间排阻色谱的机理，结合质量型检测器，采用液相色谱直接测定HP-β-CD的混合物总量。本方法可以同时检测璜丁基醚β-环糊精（简称SBE-β-CD ）、HP-β-CD、β-CD的含量，详细的分离测定方法和检测图谱如下：
采用 polySep-GFC-P3000 ( 300 mm × 7.8 mm，5 μm) ，以水( pH = 6.0，用 pH 3.5 醋酸盐缓冲液调节) 为流动相，流速为 0.8 mL·min-1，示差折光检测器检测，外标法测定。
注：示差折光检测器可以替换为蒸发光散射检测器。
参考文献:《HPLC法同时测定伏立康唑制剂中磺丁基β-环糊精钠、羟丙基-β-环糊精和β-环糊精的含量-关皓月》。
4.1.1.3 璜丁基醚β-环糊精
注1：色谱柱在样品运行完成后，用乙腈-水（1:9）冲洗；
注2：硝酸钾在流动相中是起到改善峰形的作用，高于0.1M后作用不大；乙腈有利于降低流动相黏度，进而降低压力，同时可以在保证分离度的同时提高允许效率，
若同时有考察其他环糊精的需求，可以参考上文羟丙基β-环糊精的直接测定法。
（2）毛细管电泳法
根据文献报道，条件如下：
色谱条件：高效毛细管电泳仪，未涂层熔融石英毛细管柱 (60.2 cm×50 μm×50 cm) ；运行缓冲液为 30 mmol/L 苯甲酸 -Tris 缓冲液 (pH 7.5) ；温度 25 ℃ ；压力进样 6 s(0.5 psi) ；分离电压 30 kV ；检测波长 214 nm ；检测模式为间接模式。
运行方法：开机后分别用 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液、水和运行缓冲液冲洗毛细管柱 10、5 和 5 min，每次进样前分别用上述 3 种溶液冲洗 5 min，并在电泳条件下运行 10 min。所有溶液在使用前均用 0.45 μm微孔滤膜过滤并超声脱气 2 min。典型毛细管电泳图见下图 。
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