彗星电泳实验,又称为单细胞凝胶电泳试验(Single Cell Gel Electrophoresis,SCGE),是一种用于检测DNA损伤的实验技术,可在单个细胞水平上进行。这种方法能够有效评估DNA损伤的程度,包括由受试物直接引起的DNA链断裂、碱性不稳定性位点导致的DNA链断裂,以及DNA切割修复过程中引起的瞬时DNA链断裂,是一种常用的DNA损伤评估方法。
实验原理:
注意事项:
(1)第7步如果不立即观察,可以在中和后不染色,将玻片放入无水乙醇的染缸中浸泡15分钟,然后捞出晾干并避光保存,需要时再染色。这样处理后的玻片可保存三个月。但如果需要进行脱水处理,则应选择透明底的玻片,因为磨砂玻片表面不平整,在酒精脱水后凝胶会形成颗粒,影响读片质量。
(2)在制备凝胶时,必须防止脱胶现象的发生,为脱胶会导致凝胶结构的破坏,进而影响其完整性和稳定性,从而影响实验结果的准确性和可重复性。
(3)如果 DNA 损伤严重,则产生的碎片就越多、越小,向阳极迁移的DNA碎片量就越多,迁移距离也越长,荧光染色后就能看见“彗星”样尾长并且荧光强度增强。未受损伤的 DNA 大分子则由于细胞膜的阻隔,滞留在原处。
如图所示为M059K细胞彗星结果:
本文作者是"小米"同学,在获得授权后,实验老司机将本文发表于公众号。
文稿:小米
校对:煲仔饭
参考资料:
Zhang J, Chen M, Pang Y, Cheng M, Huang B, Xu S, Liu M, Lian H, Zhong C. Flap endonuclease 1 and DNA-PKcs synergistically participate in stabilizing replication fork to encounter replication stress in glioma cells. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Apr 12;41(1):140. doi: 10.1186/s13046-022-02334-0. PMID: 35414100; PMCID: PMC9006432.
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