作者：宠物医师网编委会
原文链接：https://vetfocus.royalcanin.com/en/scientific/practical-diagnostic-cytology-for-practitioners
一、要点
1. 细胞学是一种快速、经济且高效的诊断方法，可以用于评估多种病理状况，如炎症、组织损伤、感染、增生性改变以及肿瘤的发生。
2. 细胞学的检查结果通常与组织病理学检查的结果高度一致。
3. 细胞学诊断的成功与患宠提供的详细病史及良好的取样技术密切相关。良好的取样技术以及提供充分的患者信息，有助于病理学家解读标本，提升诊断成功率。
4. 大多数恶性肿瘤可以通过细胞学检查有效诊断，尤其是当在大部分细胞中识别出至少三种关键特征时。包括细胞的形态变化、核的特征变化以及细胞与细胞之间的相互关系。通过这些特征，病理学家能够准确区分良性和恶性肿瘤，并为后续治疗提供指导。
二、引言
细胞学（即从细胞层面研究病变）在兽医临床诊断和评估各种病理情况下具有高效性，并且被广泛应用于炎症、损伤、感染、增生和肿瘤等疾病的诊断。该技术操作简单、经济、可靠、创伤小且快速（见框1），通常用于对无法解释的肿块、肿胀或其他外部病变进行细针抽吸（见图1）。此外，细胞学也适用于评估皮肤病的刮片、黏膜表面的拭子样本，以及直接涂抹在玻片上的病变、组织活检或组织表面样本。。它还常用于评估来自鼻腔、气管、支气管和肺泡空间的冲洗液，膀胱和前列腺的抽吸样本。随着技术的进步，越来越多的兽医开始采用超声引导细针抽吸术来评估肝脏、脾脏和肾脏等内脏器官或肿块的病变。
框1.诊断细胞学的优点
图1.细针活检在实践中易于操作；它快速、所需设备和患宠准备简单，只要遵循基本规则就能提供适合细胞学实验室评估的样本。
三、细胞学的优缺点
细胞学结果与组织活检的组织病理学结果通常高度相关。然而，与组织学相比，细胞学存在一定局限性，组织学提供的细胞数量远远大于细胞学，同时组织学检查能够提供更多的组织结构和细胞间相互作用信息。细胞学检查可见一些关键特征，例如基底细胞肿瘤中细胞栅栏化、脂肪瘤和血管外皮细胞瘤中与毛细血管的关联、分泌组织中腺泡和肾小管形成和细胞外基质以及上皮组织中乳头状形成。然而，对于一些疾病（如血管周围组织瘤）的诊断，细胞学获得的细胞和亚细胞信息是必要的，并且经过良好制备的细胞学标本不会出现组织学中常见的由于福尔马林固定所导致的细胞收缩及其他假象。这对于那些依赖细胞大小评估的诊断，特别是如淋巴瘤等疾病，具有重要意义。
对于大多数细胞学结果，临床兽医能够掌握采样、处理和显微镜下评估所需的基础技能和知识，不过，操作不当可能会导致样本无法提供有效的诊断（见框2）。炎症性病变可能是最容易识别的（见框3），因为它们主要依赖于识别血细胞类型、巨噬细胞的形成以及评估炎症的严重程度。某些组织的细胞通常可以通过几种不同的形态特征轻松识别，例如，约80%的皮肤肿瘤属于10种基本类型，兽医可以迅速掌握最常见的细胞学诊断，并将需要更多经验的病例转诊给专家。此外，近年来，面向临床医生的教科书、手册、图谱和相关文献变得更加广泛可得，既有纸质版也有数字版，很多资源还可以在线访问。
框2. 无法进行细胞学诊断的5个原因
图 2.核流（嗜酸性粒细胞物质的细线）是由于样品采集过程中因压力过大而导致细胞破裂。（放大倍数x1300 ）
框3.围绕囊肿、肿块或凸起的细胞学检查程序及方法
在此期间，技术和知识也得到了显着发展，尤其是在采集、分析和存储高质量显微图像方面。采集、涂片和染色样品后，进行细胞学检查所需的设备仅包括显微镜、手机、计算机、色彩图谱和临床离心机。这些设备足以支持细胞学分析的全部过程。
从商业和经济角度来看，细胞学已经成为兽医诊所临床病理学中不可或缺的一部分。更有意思的是，临床病理学专业的老师和专家们常常指出，与生物化学、病理学、血液学和实验室管理等其他临床病理学领域相比，住院医生在细胞学子专业的投入时间最多，且他们在这一领域的表现和得分通常也是最优秀的。
四、有效的样本采样和成像
通常，对于单个病灶，临床医生会送 1-4 个涂片。这些涂片会被评估细胞密度、细胞保存情况以及是否存在炎症（见框4）或恶性特征（见框5）。诊断质量的样本应具有足够的细胞密度，且固定正确，细胞均匀分布，血液污染最小。样本通常通过抽吸获取，但在某些情况下，细胞分离时也可以通过简单的针头插入获得样本。
使用22-23G针和20 ml注射器进行抽吸，只需来回几次运动即可从病变的较大、较具代表性的区域提取细胞。将抽吸到的内容物以45度角的针头轻轻压在玻片上。涂抹时，理想的做法是使用第二片玻片覆盖第一片玻片，并水平缓慢拉开，保持最小的垂直压力，然后通过快速挥动玻片约30秒，或者放在快速吹风的风扇或吹风机前进行吹干。这样可以防止细胞收缩和溶解。
框4.细胞学评估炎症
框5.恶性肿瘤标准（需要达到3以上标准）
光学显微镜检查最好使用配备计算机连接数字相机的三目显微镜，以便进行多张图像的捕捉。另一种选择是使用手机相机，通过变焦功能拍摄细胞的近距离图像（见图3）。拍摄的显微图像应通过数字化优化，调整亮度、对比度和背景的白平衡，以去除通常的黄色背景色失真。图像应裁剪以集中显示相关的诊断特征。各种免费的图像处理软件可以自动将4到16张优化后的不同诊断特征图像拼接成一张图像，从而提供更全面、准确的涂片表现，并促进诊断（见图4）。诊断图像拼贴可以以jpeg文件形式数字化传输到报告中，实时共享于视频会议程序，或用于未来的比较和研究。
图 3.显微镜下使用 100 倍物镜拍摄的 Romanowski 染色样品（左）。使用手机的变焦功能拍摄获得中间图像；右侧图像已经过颜色校正。（左照片 x300 倍;中照片和右照片 x600 倍率）
图 4.可以制作 4-16 个优化图像的拼贴画，以提供更全面和准确的样品细节。这张来自骨肉瘤的样本；注意右下角图片中的大核仁。（约300倍放大）
细胞学检查首先通过粗略检查载玻片，初步评估细胞的数量是否充足或过多，是否有血液/脂质污染，是否存在宏观结构（如细胞团块、幼虫），以及是否有明显的涂片/干燥假象。接下来，逐步使用显微镜在 3 个不同的放大倍数下进行直接观察：
I）约10-20倍：全面扫描大结构，获取结构信息，并确定最具诊断价值的区域；
II）约40-60倍：进一步精细化并解决细节；
III）100倍油镜：深入观察细胞/亚细胞的细节。
五、细胞学与肿瘤
根据提交到作者所在大学实验室的样本进行回顾，发现了一些有趣的统计数据，并证明了细胞学在研究可能的肿瘤时的实用性。在7,560个病例中，约95%来自狗（其中62%是内部数据，38%来自外部诊所）。其中，有14%的样本因无法获得完整细胞而未能诊断（见框2），而19%的可读取的玻片病例属于肿瘤性病变（其中64%是恶性肿瘤），其余大多为炎症性病变。
在三种细胞学肿瘤类型中：
间质肿瘤的总体患病率最高（42%），其中98%是犬类，2%是猫类；
圆形细胞肿瘤（32%）次之，其中88%是犬类，12%是猫类；
上皮肿瘤（26%），其中93%是犬类，7%是猫类。
犬癌症包括30%的淋巴瘤、27%的癌症、26%的肉瘤、13%的肥大细胞肿瘤和4%的神经内分泌肿瘤。犬良性肿瘤包括65%的脂肪瘤、16%的腺瘤、7%的组织细胞瘤和5%的血管周细胞瘤。猫类良性肿瘤数量少，无法评估，但有75个恶性猫肿瘤：52%为淋巴瘤，30%为癌症，9%为肉瘤，4%为肥大细胞肿瘤，3%为浆细胞肿瘤。
前五种肿瘤占犬类总体肿瘤诊断的84%，而猫类则占98%。脂肪瘤是犬类肿瘤中最常见的细胞学诊断，在外部诊所诊断的频率是其两倍，但在猫类中较为罕见（n=1）。肥大细胞瘤在犬类中发生率是猫类的两倍（8%：4%）。淋巴瘤是猫类最常见的肿瘤，比犬类更常见，诊断频率是犬类的两倍。超过三分之一的癌症是肉瘤和癌症，并且在作者专科诊所的样本中诊断频率是三倍。
六、参考文献
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