药品颜色的来源可能是活性成分本身的颜色,可能是由生产工艺中杂质引入,也可能是由于药品不稳定在贮存过程中降解产生。
综述
综述
药典 | 依据 | 方法 |
中国药典 | 通则0901 溶液颜色检查法 | 第一法:目视比色法 第二法:紫外-可见分光光度法 第三法:色差计法 |
美国药典 | General Chapter <631>COLOR AND ACHROMICITY General Chapter <855>NEPHELOMETRY, tURBIDIMETRY, AND VISUAL COMPARISON | 目视比色法 |
General Chapter <1061>COLOR-INSTRUMENTAL MEASUREMENT | 色差计法 | |
欧洲药典 | 2.2.2 DEGREE OF COLORATION OF LIQUIDS | 第一法和第二法均为目视比色法 |
目视比色法的差异
目视比色法的差异
各药典的比较内容列于下表,可以看出,中国药典的比色液是与美国药典、欧洲药典不同的,美国药典与欧洲药典配制溶液的种类虽然相同,但是配制过程还是有差异的。
而且,三家药典在色调和色号上也都有很大不同。中国药典的色号越大,颜色越深;欧洲药典的色号越大,颜色越浅;美国药典各色号则不按照深浅,没有规律。
大家在参考药典质量标准,以及申报不同国家药品注册时,一定要仔细确认、认真研读。
中国药典 | 美国药典 | 欧洲药典 | |
实验装置 | 25ml纳氏比色管 | 二者相同 | 第一法:外径12mm;第二法:内径15~25mm。 |
取样量 | 供试品溶液和比色液各10ml | 二者用量相同,温度相同 | 第一法:各2ml;第二法:液面高度40mm。 |
检查方法 | 白色背景,自上而下透视或平视 | 白色背景,自上而下透视 | 第一法:白色背景,平视;第二法:白色背景,自上而下透视 |
比色溶液配制 | 重铬酸钾液(黄色)、硫酸铜液(蓝色)、氯化钴液(红色) | 三氯化铁液(黄色)、硫酸铜液(蓝色)、氯化钴液(红色) | 三氯化铁液(黄色)、硫酸铜液(蓝色)、氯化钴液(红色) |
色调 | 六个(绿黄色、黄绿色、黄色、橙黄色、橙红色、棕红色) | 无 | 五个(棕色B、棕黄色BY、黄色Y、黄绿色GY、红色R) |
色号 | 每个色调各11个(0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10) | 20个(A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T) | B1~B9、BY1~BY7、Y1~Y7、GY1~GY7、R1~R7 |
备注 | 无色:溶液颜色与水或所用溶剂相同。 几乎无色:溶液颜色不深于相应色调0.5号比色液。 争议按第三法测定结果判定 | 争议按仪器法测定结果判定 | 无色:溶液颜色与水或所用溶剂相同;或不深于B9号比色液。 采用第一法时,比色液可密封、避光贮存于外径为12mm的无色透明中性玻璃试管中;采用第二法时,比色液需用母液临用新制 |
比色液配制
比色液配制
比色液的配制是这部分的重点,但是三家药典中所用的试剂、稀释液、配制方法均有不同,中国药典和欧洲药典的具体配制过程均列于上述依据中,但美国药典比色液的配制则需要结合《Reagents, Indicators and Solution》的colorimetric solutions(CS)部分。各药典的具体配制过程见下文。
1 中国药典的比色液
请参考通则0901,此处不赘述。
2 美国药典的比色液
混合溶剂:盐酸-水(25:975)。
氯化钴比色液:称取氯化钴(CoCl2·6H2O)约65g,溶解于1000ml混合溶剂中,量取该溶液5ml置于250ml碘瓶中,加入过氧化氢试液5ml和氢氧化钠溶液(1→5)15ml,煮沸10min,放冷,加入碘化钾2g和稀硫酸(1→4)20ml。溶解后,用0.1N硫代硫酸钠滴定液滴定游离碘,加入淀粉试液3ml作为指示剂,并将滴定结果用空白实验校正。每1ml 0.1N硫代硫酸钠滴定液相当于23.79mg的CoCl2·6H2O。用混合溶剂调整本比色液的体积,使每1ml比色液中含59.5mg的CoCl2·6H2O。
硫酸铜比色液:称取硫酸铜(CuSO4·5H2O)约65g,溶解于1000ml混合溶剂中,量取该溶液10ml置于250ml碘瓶中,加入水40ml、醋酸4ml、碘化钾3g和盐酸5ml。用0.1N硫代硫酸钠滴定液滴定游离碘,并加入淀粉试液3ml作为指示剂,并将滴定结果用空白实验校正。每1ml0.1N硫代硫酸钠滴定液相当于24.97mg的CuSO4·5H2O。用混合溶剂调整本比色液的体积,使每1ml比色液中含62.4mg的CuSO4·5H2O。
三氯化铁比色液:称取三氯化铁(FeCl3·6H2O)约55g,溶解于1000ml混合溶剂中,量取该溶液10ml置于250ml碘瓶中,加入水15ml、碘化钾3g和盐酸5ml,混匀,放置15min,加入水100ml,用0.1N硫代硫酸钠滴定液滴定游离碘,加入淀粉试液3ml作为指示剂,并将滴定结果用空白实验校正。每1ml0.1N硫代硫酸钠滴定液相当于27.03mg的FeCl3·6H2O。用混合溶剂调整本比色液的体积,使每1ml比色液中含45.0mg的FeCl3·6H2O。
美国药典中标准比色液的配制比例
色号 | 氯化钴比色液 | 三氯化铁比色液 | 硫酸铜比色液 | 水 |
A | 0.1 | 0.4 | 0.1 | 4.4 |
B | 0.3 | 0.9 | 0.3 | 3.5 |
C | 0.1 | 0.6 | 0.1 | 4.2 |
D | 0.3 | 0.6 | 0.4 | 3.7 |
E | 0.4 | 1.2 | 0.3 | 3.1 |
F | 0.3 | 1.2 | 0 | 3.5 |
G | 0.5 | 1.2 | 0.2 | 3.1 |
H | 0.2 | 1.5 | 0 | 3.3 |
I | 0.4 | 2.2 | 0.1 | 2.3 |
J | 0.4 | 3.5 | 0.1 | 1.0 |
K | 0.5 | 4.5 | 0 | 0 |
L | 0.8 | 3.8 | 0.1 | 0.3 |
M | 0.1 | 2.0 | 0.1 | 2.8 |
N | 0 | 4.9 | 0.1 | 0 |
O | 0.1 | 4.8 | 0.1 | 0 |
P | 0.2 | 0.4 | 0.1 | 4.3 |
Q | 0.2 | 0.3 | 0.1 | 4.4 |
R | 0.3 | 0.4 | 0.2 | 4.1 |
S | 0.2 | 0.1 | 0 | 4.7 |
T | 0.5 | 0.5 | 0.4 | 3.6 |
3 欧洲药典的比色液
欧洲药典中五个色调溶液的配制比例
五个色调溶液 | 体积(ml) | |||
三氯化铁比色液 | 氯化钴比色液 | 硫酸铜比色液 | 10g/L盐酸溶液 | |
B(棕色) | 3.0 | 3.0 | 2.4 | 1.6 |
BY(棕黄色) | 2.4 | 1.0 | 0.4 | 6.2 |
Y(黄色) | 2.4 | 0.6 | 0 | 7.0 |
GY(黄绿色) | 9.6 | 0.2 | 0.2 | 0 |
R(红色) | 1.0 | 2.0 | 0 | 7.0 |
棕色比色液B系列的配制比例
棕色标准比色液 | 体积(ml) | |
色调B溶液 | 10g/L盐酸溶液 | |
B1 | 75.0 | 25.0 |
B2 | 50.0 | 50.0 |
B3 | 37.5 | 62.5 |
B4 | 25.0 | 75.0 |
B5 | 12.5 | 87.5 |
B6 | 5.0 | 95.0 |
B7 | 2.5 | 97.5 |
B8 | 1.5 | 98.5 |
B9 | 1.0 | 99.0 |
棕黄色比色液BY系列的配制比例
棕黄色标准比色液 | 体积(ml) | |
色调BY溶液 | 10g/L盐酸溶液 | |
BY1 | 100.0 | 0 |
BY2 | 75.0 | 25.0 |
BY3 | 50.0 | 50.0 |
BY4 | 25.0 | 75.0 |
BY5 | 12.5 | 57.5 |
BY6 | 5.0 | 95.0 |
BY7 | 2.5 | 97.5 |
黄色比色液Y系列的配制比例
棕色标准比色液 | 体积(ml) | |
色调Y溶液 | 10g/L盐酸溶液 | |
Y1 | 100.0 | 0 |
Y2 | 75.0 | 25.0 |
Y3 | 50.0 | 50.0 |
Y4 | 25.0 | 75.0 |
Y5 | 12.5 | 57.5 |
Y6 | 5.0 | 95.0 |
Y7 | 2.5 | 97.5 |
黄绿色比色液GY系列的配制比例
棕色标准比色液 | 体积(ml) | |
色调GY溶液 | 10g/L盐酸溶液 | |
GY1 | 25.0 | 75.0 |
GY2 | 15.0 | 85.0 |
GY3 | 8.5 | 91.5 |
GY4 | 5.0 | 95.0 |
GY5 | 3.0 | 97.0 |
GY6 | 1.5 | 98.5 |
GY7 | 0.75 | 99.25 |
黄色比色液R系列的配制比例
棕色标准比色液 | 体积(ml) | |
色调R溶液 | 10g/L盐酸溶液 | |
R1 | 100.0 | 0 |
R2 | 75.0 | 25.0 |
R3 | 50.0 | 50.0 |
R4 | 37.5 | 62.5 |
R5 | 25.0 | 75.0 |
R6 | 12.5 | 87.5 |
R7 | 5.0 | 95.0 |
总结
总结
想必大家已经看出,三家药典的差异性还是很大的,所以在查阅各国药品质量标准时,绝对不能随意套用溶液颜色的限度标准。
检查过程中,还要注意以下几点:
1、 所用比色管应洁净、干燥,洗涤时不能用硬物磨刷,应用铬酸洗液浸泡后用纯化水冲净,避免表面粗糙或粘有杂物。
2、参考各国标准时,需要注意比色液、色调、色号的选择,以及检查时视线的方向。
3、检查时光线应明亮,光强度应能保证使各相邻色号的标准液清晰分辨。
4、争议结果的处理:中美药典都推荐以色差计法的检测结果为准,实验单位配备色差计也是一个发展方向呢。
现在是不是能够拿捏到各国药典的不同之处,从而灵活运用了呢?
参考文献
1、中国药品检验标准操作规范(2019年版)
2、中国药典(2020年版)
3、美国药典(43版)
4、欧洲药典(10.0版)