药品颜色的来源可能是活性成分本身的颜色，可能是由生产工艺中杂质引入，也可能是由于药品不稳定在贮存过程中降解产生。
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综述
综述
药典 | 依据 | 方法 |
中国药典 | 通则0901 溶液颜色检查法 | 第一法：目视比色法 第二法：紫外-可见分光光度法 第三法：色差计法 |
美国药典 | General Chapter <631>COLOR AND ACHROMICITY General Chapter <855>NEPHELOMETRY, tURBIDIMETRY, AND VISUAL COMPARISON | 目视比色法 |
General Chapter <1061>COLOR-INSTRUMENTAL MEASUREMENT | 色差计法 | |
欧洲药典 | 2.2.2 DEGREE OF COLORATION OF LIQUIDS | 第一法和第二法均为目视比色法 |
目视比色法的差异
目视比色法的差异
各药典的比较内容列于下表，可以看出，中国药典的比色液是与美国药典、欧洲药典不同的，美国药典与欧洲药典配制溶液的种类虽然相同，但是配制过程还是有差异的。
而且，三家药典在色调和色号上也都有很大不同。中国药典的色号越大，颜色越深；欧洲药典的色号越大，颜色越浅；美国药典各色号则不按照深浅，没有规律。
大家在参考药典质量标准，以及申报不同国家药品注册时，一定要仔细确认、认真研读。
中国药典 | 美国药典 | 欧洲药典 | |
实验装置 | 25ml纳氏比色管 | 二者相同 | 第一法：外径12mm；第二法：内径15~25mm。 |
取样量 | 供试品溶液和比色液各10ml | 二者用量相同，温度相同 | 第一法：各2ml；第二法：液面高度40mm。 |
检查方法 | 白色背景，自上而下透视或平视 | 白色背景，自上而下透视 | 第一法：白色背景，平视；第二法：白色背景，自上而下透视 |
比色溶液配制 | 重铬酸钾液（黄色）、硫酸铜液（蓝色）、氯化钴液（红色） | 三氯化铁液（黄色）、硫酸铜液（蓝色）、氯化钴液（红色） | 三氯化铁液（黄色）、硫酸铜液（蓝色）、氯化钴液（红色） |
色调 | 六个（绿黄色、黄绿色、黄色、橙黄色、橙红色、棕红色） | 无 | 五个（棕色B、棕黄色BY、黄色Y、黄绿色GY、红色R） |
色号 | 每个色调各11个（0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10） | 20个（A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T） | B1~B9、BY1~BY7、Y1~Y7、GY1~GY7、R1~R7 |
备注 | 无色：溶液颜色与水或所用溶剂相同。 几乎无色：溶液颜色不深于相应色调0.5号比色液。 争议按第三法测定结果判定 | 争议按仪器法测定结果判定 | 无色：溶液颜色与水或所用溶剂相同；或不深于B9号比色液。 采用第一法时，比色液可密封、避光贮存于外径为12mm的无色透明中性玻璃试管中；采用第二法时，比色液需用母液临用新制 |
比色液配制
比色液配制
比色液的配制是这部分的重点，但是三家药典中所用的试剂、稀释液、配制方法均有不同，中国药典和欧洲药典的具体配制过程均列于上述依据中，但美国药典比色液的配制则需要结合《Reagents, Indicators and Solution》的colorimetric solutions（CS）部分。各药典的具体配制过程见下文。
1 中国药典的比色液
请参考通则0901，此处不赘述。
2 美国药典的比色液
混合溶剂：盐酸-水（25：975）。
氯化钴比色液：称取氯化钴（CoCl2·6H2O）约65g，溶解于1000ml混合溶剂中，量取该溶液5ml置于250ml碘瓶中，加入过氧化氢试液5ml和氢氧化钠溶液（1→5）15ml，煮沸10min，放冷，加入碘化钾2g和稀硫酸（1→4）20ml。溶解后，用0.1N硫代硫酸钠滴定液滴定游离碘，加入淀粉试液3ml作为指示剂，并将滴定结果用空白实验校正。每1ml 0.1N硫代硫酸钠滴定液相当于23.79mg的CoCl2·6H2O。用混合溶剂调整本比色液的体积，使每1ml比色液中含59.5mg的CoCl2·6H2O。
硫酸铜比色液：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O）约65g，溶解于1000ml混合溶剂中，量取该溶液10ml置于250ml碘瓶中，加入水40ml、醋酸4ml、碘化钾3g和盐酸5ml。用0.1N硫代硫酸钠滴定液滴定游离碘，并加入淀粉试液3ml作为指示剂，并将滴定结果用空白实验校正。每1ml0.1N硫代硫酸钠滴定液相当于24.97mg的CuSO4·5H2O。用混合溶剂调整本比色液的体积，使每1ml比色液中含62.4mg的CuSO4·5H2O。
三氯化铁比色液：称取三氯化铁（FeCl3·6H2O）约55g，溶解于1000ml混合溶剂中，量取该溶液10ml置于250ml碘瓶中，加入水15ml、碘化钾3g和盐酸5ml，混匀，放置15min，加入水100ml，用0.1N硫代硫酸钠滴定液滴定游离碘，加入淀粉试液3ml作为指示剂，并将滴定结果用空白实验校正。每1ml0.1N硫代硫酸钠滴定液相当于27.03mg的FeCl3·6H2O。用混合溶剂调整本比色液的体积，使每1ml比色液中含45.0mg的FeCl3·6H2O。
美国药典中标准比色液的配制比例
色号 | 氯化钴比色液 | 三氯化铁比色液 | 硫酸铜比色液 | 水 |
A | 0.1 | 0.4 | 0.1 | 4.4 |
B | 0.3 | 0.9 | 0.3 | 3.5 |
C | 0.1 | 0.6 | 0.1 | 4.2 |
D | 0.3 | 0.6 | 0.4 | 3.7 |
E | 0.4 | 1.2 | 0.3 | 3.1 |
F | 0.3 | 1.2 | 0 | 3.5 |
G | 0.5 | 1.2 | 0.2 | 3.1 |
H | 0.2 | 1.5 | 0 | 3.3 |
I | 0.4 | 2.2 | 0.1 | 2.3 |
J | 0.4 | 3.5 | 0.1 | 1.0 |
K | 0.5 | 4.5 | 0 | 0 |
L | 0.8 | 3.8 | 0.1 | 0.3 |
M | 0.1 | 2.0 | 0.1 | 2.8 |
N | 0 | 4.9 | 0.1 | 0 |
O | 0.1 | 4.8 | 0.1 | 0 |
P | 0.2 | 0.4 | 0.1 | 4.3 |
Q | 0.2 | 0.3 | 0.1 | 4.4 |
R | 0.3 | 0.4 | 0.2 | 4.1 |
S | 0.2 | 0.1 | 0 | 4.7 |
T | 0.5 | 0.5 | 0.4 | 3.6 |
3 欧洲药典的比色液
欧洲药典中五个色调溶液的配制比例
五个色调溶液 | 体积（ml） | |||
三氯化铁比色液 | 氯化钴比色液 | 硫酸铜比色液 | 10g/L盐酸溶液 | |
B（棕色） | 3.0 | 3.0 | 2.4 | 1.6 |
BY（棕黄色） | 2.4 | 1.0 | 0.4 | 6.2 |
Y（黄色） | 2.4 | 0.6 | 0 | 7.0 |
GY（黄绿色） | 9.6 | 0.2 | 0.2 | 0 |
R（红色） | 1.0 | 2.0 | 0 | 7.0 |
棕色比色液B系列的配制比例
棕色标准比色液 | 体积（ml） | |
色调B溶液 | 10g/L盐酸溶液 | |
B1 | 75.0 | 25.0 |
B2 | 50.0 | 50.0 |
B3 | 37.5 | 62.5 |
B4 | 25.0 | 75.0 |
B5 | 12.5 | 87.5 |
B6 | 5.0 | 95.0 |
B7 | 2.5 | 97.5 |
B8 | 1.5 | 98.5 |
B9 | 1.0 | 99.0 |
棕黄色比色液BY系列的配制比例
棕黄色标准比色液 | 体积（ml） | |
色调BY溶液 | 10g/L盐酸溶液 | |
BY1 | 100.0 | 0 |
BY2 | 75.0 | 25.0 |
BY3 | 50.0 | 50.0 |
BY4 | 25.0 | 75.0 |
BY5 | 12.5 | 57.5 |
BY6 | 5.0 | 95.0 |
BY7 | 2.5 | 97.5 |
黄色比色液Y系列的配制比例
棕色标准比色液 | 体积（ml） | |
色调Y溶液 | 10g/L盐酸溶液 | |
Y1 | 100.0 | 0 |
Y2 | 75.0 | 25.0 |
Y3 | 50.0 | 50.0 |
Y4 | 25.0 | 75.0 |
Y5 | 12.5 | 57.5 |
Y6 | 5.0 | 95.0 |
Y7 | 2.5 | 97.5 |
黄绿色比色液GY系列的配制比例
棕色标准比色液 | 体积（ml） | |
色调GY溶液 | 10g/L盐酸溶液 | |
GY1 | 25.0 | 75.0 |
GY2 | 15.0 | 85.0 |
GY3 | 8.5 | 91.5 |
GY4 | 5.0 | 95.0 |
GY5 | 3.0 | 97.0 |
GY6 | 1.5 | 98.5 |
GY7 | 0.75 | 99.25 |
黄色比色液R系列的配制比例
棕色标准比色液 | 体积（ml） | |
色调R溶液 | 10g/L盐酸溶液 | |
R1 | 100.0 | 0 |
R2 | 75.0 | 25.0 |
R3 | 50.0 | 50.0 |
R4 | 37.5 | 62.5 |
R5 | 25.0 | 75.0 |
R6 | 12.5 | 87.5 |
R7 | 5.0 | 95.0 |
总结
总结
想必大家已经看出，三家药典的差异性还是很大的，所以在查阅各国药品质量标准时，绝对不能随意套用溶液颜色的限度标准。
检查过程中，还要注意以下几点：
1、 所用比色管应洁净、干燥，洗涤时不能用硬物磨刷，应用铬酸洗液浸泡后用纯化水冲净，避免表面粗糙或粘有杂物。
2、参考各国标准时，需要注意比色液、色调、色号的选择，以及检查时视线的方向。
3、检查时光线应明亮，光强度应能保证使各相邻色号的标准液清晰分辨。
4、争议结果的处理：中美药典都推荐以色差计法的检测结果为准，实验单位配备色差计也是一个发展方向呢。
现在是不是能够拿捏到各国药典的不同之处，从而灵活运用了呢？
参考文献
1、中国药品检验标准操作规范（2019年版）
2、中国药典（2020年版）
3、美国药典（43版）
4、欧洲药典（10.0版）
