细胞活力实验大家最熟悉的就是CCK8检测，
细胞毒性实验为代表的则是LDH检测试剂盒—Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST
两个实验操作步骤都很简单，但其实说到原理部分，很多科研工作者都是模棱两可，今天我就给大家详细解释一下，保准看完清清楚楚！
一、CCK-8实验原理：
CCK-8试剂盒是一种用于定量检测细胞增殖能力和细胞活力的工具，它的实验原理基于活细胞内线粒体脱氢酶的活性，这些脱氢酶能够催化特定的化学底物，从而产生可测量的信号。以下是CCK-8实验原理的详细解释：
1. **底物WST-8**
CCK-8试剂的主要活性成分是WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑），这是一种黄色的四唑盐。WST-8本身是水溶性的，并且不能穿过细胞膜。
2. **线粒体脱氢酶的作用**
活细胞内线粒体中的脱氢酶在细胞的代谢过程中催化各种底物的氧化还原反应。这些脱氢酶能够将WST-8作为电子受体，将其还原成水溶性的甲臜产物。这个过程需要NADH或FADH2等电子供体的参与，它们是细胞代谢活动中的关键辅酶。
3. **电子媒介剂1-Methoxy PMS**
为了提高WST-8的还原效率，CCK-8试剂中通常包含一种电子媒介剂，如1-Methoxy PMS（1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯）。这种媒介剂能够接受来自脱氢酶的电子，并将其传递给WST-8，从而促进WST-8的还原反应。
4. **甲臜的形成和吸光度测定**
当WST-8被还原时，它转化为一种黄色的甲臜染料。这种甲臜染料的形成量与活细胞内线粒体脱氢酶的活性成正比，也就是说，与细胞的代谢活性和细胞数量成正比。通过在特定波长（通常为450 nm）下测定培养基的吸光度，可以间接地评估细胞的增殖和活力。
5. **实验操作**
在实验中，将CCK-8试剂直接添加到含有细胞的培养基中，然后在细胞培养箱中孵育一段时间，以允许WST-8的还原反应发生。之后，使用酶标仪测定每个孔的吸光度，从而得到细胞活性的定量数据。
6. **数据解释**
高吸光度值通常表示高的细胞活性或细胞数量，而低吸光度值则可能表示细胞活性降低或细胞数量减少。通过比较实验组和对照组的吸光度，可以评估实验处理对细胞增殖和活力的影响。
此时再看这张原理图，相信大家豁然开朗了
CCK8产品最出名的就是日本同仁化学公司，100T售价360元，在同类产品中是最贵的；
其实CCK8相关产品目前已经非常成熟，完全可以考虑其它更具性价比的平替：
CCk-8细胞增殖与毒性检测试剂盒
货号：SD0062
价格： ¥120.00
规格：100T(1ml)
网址：http://www.ldraft.com/qdmore/46116.html
或文末阅读原文跳转
这价格还要什么自行车啊！
二、LDH检测试剂盒—Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST实验原理：
细胞毒性实验中的“LDH检测试剂盒—Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST”是一种用于评估细胞损伤和死亡的实验方法。它主要通过测量细胞培养基中乳酸脱氢酶（LDH）的活性来评估细胞膜的完整性，从而判断细胞是否受到损伤或已经死亡。以下是该试剂盒的详细实验原理：
1. **乳酸脱氢酶（LDH）的生物学角色**
LDH是一种广泛存在于细胞中的酶，尤其在细胞质中含量较高。它在糖酵解过程中起到关键作用，催化乳酸和丙酮酸之间的转化。在正常的活细胞中，LDH被限制在细胞内部。
2. **细胞损伤与LDH的释放**
当细胞遭受损伤或死亡时，细胞膜的完整性受损，导致细胞内的LDH被释放到细胞外的培养基中。因此，培养基中LDH的存在和活性水平可以作为细胞损伤和死亡的一个指标。
3. **WST作为检测底物**
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST中的“WST”指的是一种叫做WST-1（2-(4-碘苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺苯基)-2H-四唑）的化合物，（注意这和CCK-8检测里的WST-8不同奥）它是一种四唑盐，可以被还原成有颜色的产物。在该试剂盒中，WST-1作为检测LDH活性的底物。
4. **检测原理**
试剂盒中的LDH检测原理基于以下化学反应：
- LDH催化乳酸转化为丙酮酸和NADH。
- NADH作为电子供体，将电子传递给WST-1，将其还原成橙黄色的甲臜产物（formazan）。
这个反应的强度（即甲臜的生成量）与培养基中LDH的活性成正比，因此可以通过测定甲臜的吸光度来定量LDH的活性。
5. **实验操作**
实验操作通常包括以下步骤：
- 将细胞培养至96孔板中，并进行适当的实验处理。
- 在指定时间点收集培养基上清（可能包括离心以去除细胞碎片）。
- 向培养基上清中添加WST-1试剂，并在一定的温度和时间下孵育，以允许LDH催化反应的进行。
- 使用酶标仪测定培养基的吸光度，通常在490nm波长下进行（CCK-8是450nm）。
6. **结果解释**
- 培养基中LDH活性的增加表明有更多的细胞膜受损或细胞死亡，导致LDH从细胞内释放。
- 通过比较实验组和对照组的吸光度，可以评估实验处理对细胞的毒性效应。
简要总结
CCK-8实验原理
CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一种用于测定活细胞增殖和活力的实验方法。它依赖于活细胞内线粒体中的脱氢酶活性，特别是那些能够还原WST-8的酶。WST-8在脱氢酶的作用下被还原成一种黄色的甲臜染料，这个过程与细胞的代谢活动密切相关。
**关键点**：
- WST-8主要在细胞外被还原，但它需要细胞内线粒体脱氢酶提供的电子。
- 活细胞具有完整的细胞膜，允许脱氢酶和WST-8之间的电子传递，但不会让WST-8进入细胞内部。
- 死细胞由于细胞膜的破坏，其内部的脱氢酶活性可能无法有效参与WST-8的还原。
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST实验原理
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST是一种用于测定细胞毒性和细胞膜完整性的实验方法。它通过测量细胞培养基中释放的LDH活性来评估细胞的损伤或死亡。
**关键点**：
- LDH是一种在细胞质中广泛存在的酶，当细胞膜受损时，LDH会被释放到细胞外。
- 活细胞的细胞膜完整，不会释放LDH到培养基中。
- 死细胞或受损细胞的细胞膜不完整，导致LDH释放到培养基中，可以通过检测培养基中的LDH活性来评估细胞的损伤程度。
如何区分活细胞和死细胞
- **CCK-8**：通过测量细胞内线粒体脱氢酶活性来间接反映细胞的活力和增殖状态。活细胞的代谢活性高，导致更多的WST-8被还原，从而产生更高的吸光度。死细胞由于代谢活性降低，对WST-8的还原贡献较小。
- **Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST**：通过测量培养基中释放的LDH活性来直接评估细胞的损伤和死亡。活细胞不会释放LDH到培养基中，而死细胞会释放LDH，导致培养基中LDH活性的增加。
结论
尽管两种实验方法都涉及到脱氢酶和WST，但它们的原理和应用场景有所不同：
- **CCK-8** 更侧重于评估活细胞的代谢活性和增殖状态。
- **Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST** 更侧重于评估细胞膜的完整性和细胞的损伤或死亡状态。
最后分别附上日本同仁化学公司的CCK-8和LDH检测试剂盒—Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST说明书；
公众号发送CCK8即可获取原文档。
如有帮助，记得右小角在看和点赞奥！
