一、细胞迁移
细胞迁移实验是研究细胞在体外条件下移动能力的一种实验方法，广泛应用于细胞生物学、肿瘤学和免疫学等领域。细胞迁移实验基于细胞对环境变化的反应能力，这些变化可以是物理的（如空间间隙）或化学的（如梯度差）。实验目的是模拟并观察细胞如何在这些条件变化下移动，从而了解细胞迁移的机制和影响因素。
1、细胞划痕实验
（文献：Cell Migration and Invasion Assays as Tools for Drug Discovery）
以下是细胞迁移实验的基本步骤：
1）在适当的培养皿中培养细胞至约80-90%汇合。
2）用无菌移液枪头或划痕工具在细胞单层上划出一道划痕，模拟伤口。轻轻清洗培养皿以去除浮动细胞。
3）添加新的培养基，可以根据实验需要添加不同的处理物质（如药物、细胞因子等）。
4）使用显微镜观察并拍摄划痕后的即时图像（0小时）。将培养皿放回培养箱。
5）定期（如6小时、12小时、24小时等）取出培养皿，观察并拍摄细胞迁移的图像。
6）使用图像分析软件（如ImageJ）测量不同时间点划痕的宽度或迁移的细胞数。计算细胞迁移率并进行统计分析。
7）汇总实验数据，绘制细胞迁移曲线图。
结果图展示
（文献：Stathmin通过促进伪足形成介导TNF-α诱导的皮肤成纤维细胞迁移）
2、Transwell迁移实验
以下是基本步骤
1）在24孔板中放置Transwell插入物。向每个Transwell上室添加适量无血清培养基（通常为100-200 µL），向下室添加含有化学诱导剂的培养基（通常为600-800 µL）。
2）用无菌PBS清洗培养的细胞。使用胰酶消化细胞，并加入含有无血清培养基的管中中止消化。计数细胞，并调整细胞悬液至适当浓度（例如1×105 cells/mL）。
3）向Transwell上室中添加适量的细胞悬液（通常为100-200 µL）。小心处理以避免气泡形成。
4）将Transwell板放入37°C、5% CO2培养箱中孵育24-48小时，以允许细胞迁移。
5）孵育结束后，取出Transwell插入物。
6）用无菌PBS轻轻清洗上室，去除未迁移的细胞。
7）用固定液（如甲醇或4%多聚甲醛）固定下室迁移的细胞，固定时间通常为10-15分钟。
8）用PBS清洗并染色（如0.1%结晶紫染色或DAPI染色）。
9）用棉签擦去上室膜上的未迁移细胞。使用显微镜观察下室膜上的迁移细胞，并拍摄图像。计数多个视野中的迁移细胞数，计算平均值。
10）汇总迁移细胞数量，进行统计分析，绘制细胞迁移图。
结果图展示
二、细胞侵袭
（文献：Mutational drivers of cancer cell migration and invasion）
细胞侵袭实验模拟体内细胞穿越基质屏障的过程，通过在Transwell插入物的膜上涂覆一层基质胶（如Matrigel）来模拟ECM。细胞在引诱剂（如趋化因子或生长因子）存在下，穿过基质胶和带孔的膜迁移到下室。这一过程涉及细胞对基质胶的降解和穿透能力，是研究癌细胞侵袭性的重要方法。
1、Transwell细胞侵袭实验
以下是实验步骤
1）选择合适孔径（通常为8 µm）的Transwell插入物。在插入物的膜上均匀涂覆一层基质胶（如Matrigel），模拟ECM。
2）将插入物放置在24孔板中，让基质胶在37°C下固化（通常需要30分钟至1小时）。
3）用无菌PBS清洗培养的细胞。使用胰酶消化细胞，并加入含有无血清培养基的管中中止消化。计数细胞，并调整细胞悬液至适当浓度（例如1×105 cells/mL）。
4）向Transwell上室中添加适量的细胞悬液（通常为100-200 µL）。向下室添加含有化学引诱剂的培养基（通常为600-800 µL）。
5）将Transwell板放入37°C、5% CO2培养箱中孵育24-72小时，以允许细胞侵袭。
6）孵育结束后，取出Transwell插入物。用无菌PBS轻轻清洗上室，去除未侵袭的细胞。用固定液（如甲醇或4%多聚甲醛）固定下室侵袭的细胞，固定时间通常为10-15分钟。用PBS清洗并染色（如0.1%结晶紫染色或DAPI染色）。
7）用棉签擦去上室膜上的未侵袭细胞。
8）使用显微镜观察下室膜上的侵袭细胞，并拍摄图像。计数多个视野中的侵袭细胞数，计算平均值。
9）汇总侵袭细胞数量，进行统计分析，绘制细胞侵袭图。
结果图展示
【注意事项】
1）使用基质胶时，需要在铺胶前将枪头和耗材置于4度冰箱中，以避免配胶时直接凝固。同时，铺胶的厚度需要摸索，注意铺胶过程不要产生气泡，保持均匀，以避免影响实验结果。
2）在制备细胞悬液前，可以让细胞进行12-24小时的血清饥饿，以去除血清的影响。消化细胞后，用PBS洗涤1-2遍，然后用无血清培养基重悬细胞。
3）细胞悬液的量需要摸索，例如200μl加入Transwell小室，下层培养液一般加入600μl含15%FBS的培养基。注意避免在小室和下层培养液之间产生气泡，因为气泡会减弱趋化作用。
4）在重复使用小室时，应注意避免损伤小室膜，并在使用前检查是否有裂缝。
5）在小室内，细胞可能呈现非贴壁形态，而是圆形聚集成团，这属于正常现象。
6）细胞接种时应尽量均匀，建议沿着壁缓慢加入。
本文作者是“欣欣子"同学，在获得授权后，实验老司机将本文发表于公众号。
文稿：欣欣子
校对：煲仔饭
参考资料：
https://medicine.biorun.com/single/20
https://www.hainmc.edu.cn/ecmd/info/1471/10334.htm
https://www.icellbioscience.com/news/ScienceContent/1430
https://www.cqwestern.net/exper-i257.html
https://www.cqwestern.net/exper-i257.html
