​革兰染色标准操作规程

学术   2025-01-24 07:11   浙江  
1. 目的
规范革兰染色标准操作规程。
2. 原理
细菌样本先经紫色草酸盐结晶复合物染色,之后用 Lugol- PVP 媒染剂处理以促进染料与革兰阳性菌的结合。经乙醇丙酮的脱色作用,革兰阴性菌中的结晶紫会被洗脱。番红精则是作为复染剂:革兰阴性菌呈现粉红色,而革兰阳性菌呈现紫色。
3. 试剂
3.1. 结晶紫草酸盐溶液:结晶紫 2%、乙醇20%、草酸 0.8%。
3.2. 稳定 Lugol-PVP复合物:碘 1.3%、碘化钾2%、PVP(聚乙烯咯烷酮)10%。
3.3. 脱色剂:95%乙醇50%、丙酮 50%。
3.4. 番红精溶液:番红精0.25%、95%乙醇 10%。
4. 操作步骤
4.1. 初染:第一液初染剂(结晶紫)染色 10s、水洗
4.2. 媒染:第二液媒染剂(碘液)染色 10 s,水洗。
4.3. 脱色:第三液脱色剂(95%乙醇)脱到无紫色脱落为止,10~20s水洗。
4.4. 复染:第四液复染剂(石炭酸复红或沙黄)染色10s,水洗。自然干燥后镜检。
5. 质量控制
5.1.采用大肠埃希菌 ATCC25922质控标准菌株,每周1次有室内质控记录。
5.2. 采用金黄色葡萄球菌 ATCC 25923 质控标准菌株每周1次有室内质控记录。
6. 结果判断
革兰阳性菌呈紫色,革兰阴性菌呈红色。
革兰氏阳性菌(G+)显紫色优瑞生物)
革兰氏阴性菌(G-)显红色(图片源于优瑞生物)
7. 注意事项
7.1. 染色的结果常受操作者技术影响,尤其是容易过度脱色,往往阳性染成阴性。
7.2. 在同一载玻片上,需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌做阳性及阴性对照。
7.3. 染色关键在于涂片和脱色,涂片不宜过厚,固定不宜过热,脱色不宜过度。
7.4. 菌龄以18~24h为佳。
8. 用途
8.1. 鉴别细菌:可将细菌分为阳性和阴性两大类,因而可以初步识别细菌,缩小范围,有利于进一步鉴定。
8.2. 选择药物:革兰阳性菌与阴性菌的细胞壁结构有很大差别,因而抗菌药物有差异。
资料来源:周庭银、倪语星、 胡继红、 徐英春、 吴文娟主编的《临床微生物检验标准化操作程序》,上海科学技术出版社。

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