qPCR扩增效率130%是什么原因?
比较正常的qPCR扩增效率应该在90%-110%之间,太高的话,意味着反应体系内有非正常的扩增。通常首先要怀疑的就是有引物二聚体或非特异扩增,这时只需要观察融解曲线就可以确认,如果融解曲线有两个或更多的峰,就是非特异扩增造成的。优化方向就是分析非特异峰的形状,判断是引物二聚体还是模板非特异扩增产物,确认来源后进行优化。
如果融解曲线正常,那可能是模板稀释的浓度不对,建议从头再配一次模版。
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