教材研读
单克隆抗体的制备
制备单克隆抗体需要经过若干个环节,每个环节的目的是什么呢?
NO.1 单克隆抗体的定义
由单一的B淋巴细胞经过克隆,形成基因型相同的细胞群,由这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。
【北师大版选择性必修三 P54】
北师大版选择性必修三对单克隆抗体所下的定义为:只含有针对一个抗原决定簇的抗体称为单克隆抗体。
NO.2 单克隆抗体的制备
【制备思路】
要想获得大量的单一抗体,首先需要利用动物细胞融合技术得到能够无限增殖的针对单一抗原决定簇的杂交瘤细胞,然后将杂交瘤细胞进行体内或体外培养,获得单克隆抗体。(北师大版选择性必修三P54-P55)
【教材对比】
人教版
北师大版
对比两个不同版本的教材,不难发现人教版是将制备过程各环节的介绍有机融入到插图中,而北师大版则是先通过文字介绍各环节,后辅以图示。那我们不妨利用北师大版的文字介绍+人教版的插图,梳理单克隆抗体制备的过程。
【制备过程】
1
小鼠免疫处理
用提纯的特定抗原免疫实验动物,从其脾脏中获取针对不同抗原决定簇的多种B淋巴细胞。
2
动物细胞融合
用灭活的病毒或PEG诱导B细胞和骨髓瘤细胞进行融合。
3
筛选杂交瘤细胞【多种】
由于诱导融合后得到的产物有多种类型的细胞:未融合的细胞;两个细胞融合(B细胞-瘤细胞,B细胞-B细胞,瘤细胞-瘤细胞);多细胞融合。
我们需要的是B细胞和瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞,因此需要进行第一次筛选。第一次筛选利用特定的选择培养基——HAT培养基。
3
筛选能产生特定抗体
的杂交瘤细胞【一种】
由于第一次筛选得到的是多种杂交瘤细胞,而我们所需要的是某种特定的杂交瘤细胞。
可以利用抗原-抗体特异性结合的特点,对体外培养的杂交瘤细胞再次进行筛选。在抗体检测前,需要将杂交瘤细胞分散开,以便区别抗体。
因第一次有限稀释法-克隆化培养-抗体检测后,阳性孔中的细胞无法保证来自单个细胞。
故需要重复进行取阳性孔的细胞-稀释-培养-抗体检测的步骤若干次。也就是要进行多次筛选才能获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
3
培养能产生特定抗体
的杂交瘤细胞
分为体内培养(腹腔培养)和体外培养两种途径,它们各有优缺点。
3
提取单克隆抗体
体内培养:从腹水中获得
体外培养:从细胞培养液中获得
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