制备液相系统常用于混合样品中目标化合物的分离纯化，建立合适高效的分析条件是获取高纯度目标化合物的重要环节之一。分析条件的优化通常在分析规模上进行，这一过程包含流动相筛选、梯度优化等，各环节都需要消耗大量时间。此外，样品回收后纯度复测通常需要手动转移至进样器完成，增加了人力成本。因此，本文以氢化可的松的纯化过程为例，展示岛津分析制备双流路系统搭配LabSolutions MD方法开发软件，将条件优化、放大制备、纯度复测等过程集中于单一系统中，以完成整个工作流程。
图1 制备纯化的工作流程
岛津分析制备双流路系统
单一系统实现从分析到制备的方法放大及纯度和回收率的确认
利用方法开发软件（LabSolutions MD）自动创建分析方案并实现分离条件优化
LH-40液体处理器可直接将馏分再进样于分析流路，完成纯度检测
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分析规模下分离条件的优化
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条件优化前，氢化可的松与主要杂质水杨酸之间非常接近（图2）。此时如果增加上样量可能影响两种化合物之间分离进一步恶化，从而导致回收率降低。因此，优化分离条件至关重要。常规的优化方式，往往需要人为设置多个方法来逐个验证，消耗大量时间且过程复杂繁琐。LabSolutions MD是一款支持方法开发的专用软件，通过对不同参数的设定，可自动生成分析时间表，提高优化效率。在本案例中，设置了三个初始浓度及三种不同水平梯度，可生成九种分析方案（图3），获得如图4所示的分析结果。其中方案③分离度最好。
图2 分离条件优化前色谱图
图3 LabSolutions MD自动生成分析方案
图4 LabSolutions MD优化分离条件结果
方法③为最优选择
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上样量的优化
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在前序优化条件下，分别注入10、20、30、40、50和100µL的氢化可的松溶液（10000mg/L）。在100μL进样时，氢化可的松和水杨酸的分离并不充分（图5中蓝色椭圆内），同时出现了一个未知的小峰（图5中红色圆圈），表明氢化可的松没有完全分离。而当进样量为50µL时，氢化可的松与相邻峰分离良好。因此，采用50µL为分析条件进样量。
完成上述工作后，根据制备柱及分析柱之间横截面积比将已优化分析条件放大至制备规模，进行制备纯化过程。
图5 不同上样量的优化结果
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目标化合物的收集
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当完成条件优化后，将方法放大至制备规模进行目标化合物的收集。使用紫外检测器信号触发收集。放大后，氢化可的松与水杨酸之间保持充分分离的状态（图6）。
图6 UV触发制备色谱图
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纯度及回收率的确认
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利用LH-40可进样的特点，将已收集的氢化可的松重新注入分析流路进行检测，同时将氢化可的松标准混合溶液进样分析。根据标准品及回收目标化合物纯度色谱图，采用面积归一化法，获得的目标化合物纯度以及回收率均保持在较高的水平。
图7 纯度检测色谱图
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总结
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利用岛津分析制备双流路系统与LabSolutions MD软件的高效结合，可以将制备纯化分析的全过程统一于单一系统完成。该流程包括在分析规模上优化分离条件、扩大分馏规模以及确认纯度和回收率等。可以有效的提高制备效率，同时降低成本，减少实验过程中人为因素的干扰。
下期预告
通过紫外信号触发的制备色谱图中，在氢化可的松的底部有一个非常小的峰（如图6红色框内），表明在最终的分馏样品中可能仍然有杂质的存在，那面对这样的问题，我们又将如何解决？将在下一期介绍双信号同时触发收集进一步提高回收纯度及回收率的相关方案。
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