脂肪肝综合征（fatty liver syndrome，FLS）是蛋鸡产蛋期常见的营养代谢性疾病，包括“简单脂肪变性-脂肪性肝炎-肝纤维化-肝硬化”等多阶段发病过程，给我国家禽产业带来一定经济损失。脂肪肝模型构建是探究FLS发病机理，筛选营养调控措施及后续疾病预防评价的关键。然而，关于家禽肝细胞脂肪变性模型的研究较少。 以鸡胚原代肝细胞（chicken embryo liver，CEL）为研究对象，通过油酸诱导建立原代肝细胞脂沉积模型，并探究FLS不同阶段所需的诱导时间，为家禽FLS的研究提供理论依据。近期，西北农林科技大学动物科技学院杨小军课题组完成的题为“油酸诱导鸡胚原代肝细胞脂沉积模型的构建”在《中国农业科学》2024年第57卷23期正式发表。
该试验选用18胚龄的CEL，待细胞生长至铺满皿底80%左右，更换含400 μmol·L-1油酸的培养基进行处理，培养24、48和72 h后，对细胞进行油红O染色，并测定脂质含量，同时分析与脂代谢、炎症及纤维化相关基因的mRNA和蛋白水平。结果表明， 与对照组相比，油酸处理24 h后细胞开始出现大量红色脂滴，且随诱导时间的增加红色逐渐加深（P<0.05），表明细胞内脂滴增多，同时TC、TG水平显著升高（P<0.05）。![]()
不同时间的油酸诱导对鸡胚肝细胞TC、TG含量的影响RT-PCR结果显示，油酸诱导24 h后，ACC、FAS、ELOVL6、SREBP等脂合成相关基因表达量显著升高（P<0.05），表明油酸处理24 h后细胞发生脂沉积。![]()
不同时间的油酸诱导对鸡胚肝细胞脂代谢相关基因的影响ELISA结果显示，IL-6、IL-1β和TNF-α含量在油酸诱导24 h时无显著变化（P>0.05），随诱导时间增加，IL-6水平在48 h时有升高趋势（P=0.052），而在油酸处理72 h后，IL-6和IL-1β水平都显著高于对照组（P<0.05），表明油酸处理48 h后细胞开始发生炎症反应并随诱导时间延长而增加。![]()
不同时间的油酸诱导对鸡胚肝细胞炎性因子的影响
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不同时间的油酸诱导对鸡胚肝细胞蛋白表达的影响
此外，Western blot结果显示，与对照组相比，48 h油酸处理组IL-6蛋白表达水平显著升高（P<0.05），与ELISA结果一致。同时促纤维化标志物COL1A1和FIBRONECTIN蛋白表达水平升高（P<0.05）；而72 h油酸处理组的IL-6、COL1A1和FIBRONECTIN蛋白表达水平均显著高于对照组（P<0.05）。综上， 在鸡胚原代肝细胞培养基中添加400 μmol·L-1油酸诱导24 h可建立肝细胞早期脂沉积模型，且48 h时炎症发生，72 h发生纤维化。西北农林科技大学动物科技学院刘艳利为该文的通信作者，王超慧和张利敏为该文的共同第一作者。
该研究得到国家自然科学基金项目（32372910）、陕西省科技项目（2022GD-TSLD-46-0302，K3031223077，2023BSHEDZZ151）、大学生创新创业训练计划项目（2024004609C，202400460AC）的资助
王超慧, 张利敏, 孙喜, 李思静, 杨小军, 刘艳利. 油酸诱导鸡胚原代肝细胞脂沉积模型的构建[J]. 中国农业科学, 2024, 57(23): 4806-4814.
WANG ChaoHui, ZHANG LiMin, SUN Xi, LI SiJing, YANG XiaoJun, LIU YanLi. The Model Establishment of Lipid Deposition in Primary Chicken Embryo Liver Cells Induced by Oleic Acid[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2024, 57(23): 4806-4814.
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