干旱和盐胁迫是影响植物生长发育,限制作物产量和品质的关键因素。谷子作为新兴模式作物具有独特的逆境应答机制。因此,筛选和鉴定谷子抗逆相关基因,深入研究谷子抗逆分子机制,在研究植物响应逆境的分子生物学领域具有谷子特有的优势。
近期,山西农业大学谷子研究所赵晋锋课题组完成的题为“谷子SiCIPK21的克隆及功能分析”在《中国农业科学》2024年第57卷22期正式发表。该研究利用生物信息学分析SiCIPK21启动子区域的顺式作用元件,预测其蛋白与拟南芥AtCBL的互作关系。通过PCR技术克隆SiCIPK21,构建融合表达载体在烟草中瞬时表达,确定亚细胞定位。从谷子品种豫谷1号叶片中特异性扩增SiCIPK21的部分片段,构建重组载体VIGS-pTRV2-SiCIPK21,以谷子八氢番茄红素脱氢酶(SiPDS)为指示基因,选取二叶期的谷子幼苗,通过子叶注射进行侵染,利用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术研究盐(250 mmol·L-1 NaCl)胁迫下SiCIPK21在谷子苗期的作用。在拟南芥中过表达SiCIPK21获得T3代转基因株系。在不同浓度NaCl(150/175 mmol·L-1)、甘露醇(300/400 mmol·L-1)和ABA(0.25/0.5 μmol·L-1)处理下对萌发期的表型进行分析,同时,对苗期的耐盐和耐旱表型进行分析。亚细胞定位显示,SiCIPK21位于细胞核。SiCIPK21可能与拟南芥AtCBL2、AtCBL3、AtCBL4、AtCBL9和AtCBL10互作。SiCIPK21启动子区域含有逆境应答元件,暗示SiCIPK21可能参与谷子的逆境应答。VIGS基因沉默试验表明,沉默谷子SiCIPK21植株对盐胁迫的敏感性增加。SiCIPK21的VIGS载体构建及沉默SiCIPK21谷子的耐盐性鉴定通过遗传转化获得3个独立的T3代拟南芥过表达株系(2#、3#和6#)。在不同浓度NaCl(150/175 mmol·L-1)、甘露醇(300/400 mmol·L-1)和ABA(0.25/0.5 μmol·L-1)条件下的萌发率、萌发速度、绿色子叶展开率、根系长度和鲜重均显著高于野生型植株(WT);在拟南芥苗期,过表达株系的成活率和叶绿素含量显著提高,对盐胁迫和干旱的耐受性增强。萌发期盐胁迫下过表达SiCIPK21拟南芥的表型
苗期盐胁迫对SiCIPK21过表达拟南芥生长的影响萌发期SiCIPK21过表达拟南芥对渗透胁迫的耐受性
综上,SiCIPK21是植物响应盐和干旱胁迫的正调控因子,SiCIPK21可作为提高谷子抗逆分子育种的候选基因。山西农业大学谷子研究所赵晋锋副研究员为该研究的通信作者,主要从事谷子抗逆关键基因发掘与分子育种;杜艳伟副研究员为该研究的第一作者,主要从事谷子育种与种质创新。该研究获得山西省基础研究计划(202103021223153)、山西省基础研究计划(202103021224163)、国家重要特色物种谷子育种联合攻关项目(gzlg-01-03)、山西农业大学科技创新提升工程(CXGC202440)的资助。杜艳伟, 阎晓光, 赵晋锋, 贾苏卿, 王高鸿, 余爱丽, 张鹏. 谷子SiCIPK21的克隆及功能分析[J]. 中国农业科学, 2024, 57(22): 4416-4430.
DU YanWei, YAN XiaoGuang, ZHAO JinFeng, JIA SuQing, WANG GaoHong, YU AiLi, ZHANG Peng. Cloning and Functional Verification of SiCIPK21 Gene in Foxtail Millet[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2024, 57(22): 4416-4430.
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