Chip-Seq分析(2)测序数据过滤和质控

学术   科学   2024-07-14 15:27   重庆  

测序数据的质控和过滤是生物信息学分析中的重要步骤,其主要目的是保证数据的质量和可靠性,从而提高后续分析结果的准确性和可信度

  1. 去除低质量数据:测序过程中可能会产生一些质量较差的读数(reads),这些读数可能包含大量错误。通过质控和过滤,可以去除这些低质量读数,保证后续分析的数据基础更加可靠。

  2. 减少误差:测序数据中的错误可能会导致后续分析结果的不准确,例如变异检测、基因组组装等。质控和过滤可以减少这些误差,提高分析的准确性。

  3. 降低噪音:在测序数据中,可能存在一些噪音信号,这些噪音会干扰真实信号的检测和解释。通过过滤步骤,可以减少噪音的影响,提取出更有意义的数据。

  4. 提高下游分析的效果:质控和过滤后的数据质量更高,能够更好地支持下游的各类生物信息学分析,如序列比对、变异检测、基因表达分析等,确保这些分析结果更加可靠和准确。

具体的质控和过滤步骤包括:

  • 去除低质量碱基(通常通过质量得分来评估)。
  • 去除适配子污染序列。
  • 去除过短或过长的读数。
  • 去除重复序列。
  • 去除PCR引物序列等。

使用fastp进行质控和过滤

单端测序

fastp -i \
 00.rawdata/ABA_rep2_R1.fastq.gz \
  -o ./ABA_rep2_R1.fastq.gz \
  --html ABA_rep2_fastp.html \
  --json ABA_rep2_fastp.json \
  --thread 1 \
  --adapter_sequence AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCA \
  --adapter_sequence_r2 AGATCGGAAGAGCGTCGTGTAGGGAAAGAGTGT \
  --qualified_quality_phred 20 \
  --length_required 50 \
  1>logs/quality_control.log 2>&1

双端测序

fastp -i 
../00.rawdata/1low-1_R1.fq.gz \
-I ../00.rawdata/1low-1_R2.fq.gz \
-o ./1low-1_R1.clean.fastq.gz \
-O ./1low-1_R2.clean.fastq.gz \
-j 1low-1.json \
-h 1low-1.html \
-t 4 \
-adapter_sequence AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCA \
-adapter_sequence_r2 AGATCGGAAGAGCGTCGTGTAGGGAAAGAGTGT \
-qualified_quality_phred 20 \
-length_required 50 \
1>logs/quality_control.log 2>&1
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