调谐失败,应该_?A忽略,B再做一次,C维修?

企业   教育   2024-11-28 07:59   上海  


什么时候做调谐?
a:从不做调谐
b:开机后调谐

首先我们要了解什么是调谐?
LCQQQ的调谐有两种自动调谐和检验调谐~
自动调谐(AutoTune)可以理解为,将已知质荷比(m/z)和浓度的标准物质(即调谐液)持续的打入质谱,校正质谱参数来使得离子响应最佳、m/z最准确。
检验调谐(CheckTune)还是通过上述调谐液打入质谱,但只检查质谱的分辨率和质量轴是否在正常状态,不会对质谱参数进行修改。

回到之前的问题,什么时候调谐?
我们建议大家定期去做一下checktune,来检查四极杆的状态,比如频繁使用质谱的情况下,每个月检查一次。
阅读文字太费眼?点击这里看视频哦!

在checktune调谐报告中,主要关注以下三个方面,质量准确度、分辨率和响应。

质量准确度和分辨率分别用两个delta来评价,

第一个delta是调谐离子的实测m/z和目标m/z的差值,评价质量轴有没有偏掉;

第二个delta是质谱峰实测FWHM(半峰宽)和目标FWHM的差值,评价分辨率是否达标。

在不同分辨率下,不同m/z,不同的仪器型号,这两个delta的阈值会不同,会显示在软件的调谐界面以及软件的帮助中;

以6470调谐界面规定的tolerance为例


Checktune报告结果都是绿色pass,就一定意味着质谱是OK的吗?

不一定的,我们还要看Abundance,即调谐离子的响应,不同型号不同状态的仪器,这个值没有固定指标。报告可能一片绿色(pass),但此时响应并不好。

判断离子强度推荐和本机之前调谐时的响应对比,只要下降不是很多就可认为正常。但响应如果成倍的下降,甚至差了一个数量级,就要对仪器状态提出质疑了!


第一种常见的强度问题是所有离子强度都偏低。原因可能有很多,我们建议先检查仪器状态。

如果喷雾不正常,要检查一下喷针和调谐液传输系统,如果喷雾正常,建议维护一下离子源,再去进行一次Autotune。

第二种如下图所示,118和322响应明显偏低,这种低端响应下降严重,高端响应变化不大,且MS1 MS2都如此的调谐报告,会把问题指向毛细管污染。


综上,当检验调谐失败了,响应比较差 或 报告显示adjust,怎么办呢?

a:检验调谐失败,马上报修!
b:检验调谐失败,检查仪器状态!

c:再做一个自动调谐。

调谐失败不用慌,先检查喷雾、检查真空,逐个排查并维护后,再做个自动调谐…
所以,答案b&c~

如何检查喷雾?

打开手电筒,如图,光通过另一侧视窗,打进离子源,在当前视窗处可观察到喷雾。

如果喷雾抖动不连续,甚至看不见,需要考虑液体的连接是否通畅,并检查喷雾针


当然,在运行调谐之前,就应该确认真空状态!在软件界面的监测栏里,可查看真空。LCMS的真空包括粗真空/高真空。如果粗真空度太“好”,可能是毛细管堵塞,如果粗真空不达标,可能是由于机械泵等故障。

点击视频【LCMS故障排查】学起来!


喷雾和真空都正常后,要运行一次自动调谐!综上,什么时候运行Autotune呢?
a:质谱开机,为检查仪器状态,要自动调谐!
b:质谱放空并维护后,要调整仪器至最佳状态,要自动调谐。
c:Checktune报告显示需要调整,需要自动调谐来调整仪器参数。
答案是全选~

那么自动调谐怎么做呢?Autotune的视频操作过程,大家可以参考一下:
点击图片即可免费查看自动调谐完整操作视频
‍‍不同版本的Masshunter的调谐界面略有不同,但大概都会包含以下内容:

①正负模式的选择

②Tune Unit Only:是否只调这一种分辨率
③Report below 100m/z:是否验证100以下的m/z的离子
可根据实际使用情况☑,比如不做负模式,建议只调正模式即可。


自动调谐成功完成,报告也弹出来了,接下来?

a:万事大吉,开始进样!

b:查看调谐报告!

答案当然是b~

自动调谐成功后,会自动弹出调谐报告,参数会覆盖每次采集方法中默认调用的调谐文件,同时在本地还会生成以日期时间命名的电子报告。

调谐报告中开头都会详细记录调谐时质谱的基本情况:


自动报告中还提供了质谱的调谐结果,我们一般会重点关注EMV,即电子倍增器电压,用于反映其老化程度,对于安捷伦LCQQQ6400系列,EMV接近3000v时推荐更换电子倍增器。


Autotune报告中还会提供MS Scan(扫描图),可以检查背景信号。


@图文编辑:邢宇


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