最近收集了几个实验室中常发生的真实案例，来吧，福尔摩斯分析员，一起排查排查![]()
~ 拖尾、分叉、丑峰……它们可能因为_？阅读的案例越多，故障排查越能够得心应手！![]()
昨天做实验峰形都是正常的，今天做，就发现有色谱峰分裂了！是不是色谱柱有问题？是不是系统有污染？喂，不要乱猜！应该从实验本身溯源，实验条件和之前正常时，发生了哪些改变？①分析谱图发现，前面出峰的化合物，峰分叉明显，后面有所改善！②流动相初始比例为甲醇：水=20：80，缓慢升高甲醇比例到100%的梯度洗脱方法！③溯源后发现，实验条件都没变！实验员准备样品时，改用了纯甲醇溶解样品，看到这个液相条件，你想到了__？戳下方![]()
溶剂效应有一个常见特征，就是它对保留时间靠前的峰影响更大，另外，溶剂效应引起的峰形变化也不止图中展示的形态，但都是使峰趋向于分裂的状态~
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做LCMS时，单组分峰型还不错，在方法里多加一些化合物，色谱峰峰型就很“丑”！为啥呢？
②从单一组分到多组分，只修改了采集方法，难道是方法设置的有问题呢？戳下方![]()
检测器采集频率会影响色谱图的点数，采集速率过快，数据点过多，导致噪音增大，采集速率太慢，数据点过少，可能造成色谱峰变形，无法准确定量。液相检测器方法参数中峰宽影响了采集频率，应略小于色谱图上最窄的色谱峰的半峰宽。如下图所示，DAD采集频率20HZ和5HZ相比，前者分离度明显增加，峰型改善。LCMS方法参数中Dwelltime驻留时间影响了采集频率，驻留时间可以结合峰底宽进行设定~举个栗子：峰底宽为0.2min（12000ms）的色谱峰，需要大概20个采样点，所以采集频率就是~12000ms/20=600ms，如果当前采集6个离子对，可以这样计算驻留时间~ 600ms/6=100ms~关于LCMS采集频率的设置，大家可以点击这里
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一直使用成熟的方法做样，某一天突然出现这样的现象：每个峰都有不同程度的分叉和变形，若是你遇到这样的问题会怎么做？①排查发现，这台仪器做其他项目时峰型是正常的，可以排除流动相和仪器故障~两个项目不同点是色谱柱~②这个项目使用的是一根“有些年头”的色谱柱![]()
，调取压力线发现，较之前压力明显下降~戳下方![]()
色谱柱使用久了，筛板堵塞、键合相流失、塌陷等，都是可能会发生的，此时柱效测试、压力监测，可以帮助我们判断是否需要更换新柱子~定期使用标准品、固定方法做柱效测试，经过数据处理得到“理论塔板数”结果并做好记录，定期淘汰色谱柱，对于色谱柱的管理是非常建议的哦~那么，如何做柱效测试？新柱拆封后有哪些注意点？点击链接新色谱柱的使用注意事项！
实验员小A今天做样，试用了一个新色谱柱（非安捷伦色谱柱），所有的峰形出现这样的拖尾和展宽的现象，这是什么原因导致的呢？戳下方![]()
如果使用的是其他品牌的色谱柱，就要注意色谱柱接头由于伸出不足，在柱接头处会引入额外的死体积，从而导致峰形变差。【解决方案】使用匹配的管线接头链接色谱柱，或者使用A-line接头~关于死体积对于峰型的影响，大家可以点击这里
虽同属拖尾问题，不过这次，只有一个峰出现拖尾现象，其他峰是没问题的，这种情况下该考虑什么因素呢？提示：其他峰都好好的，可以排除仪器和色谱柱问题~
戳下方![]()
碱性化合物的拖尾问题如何解决呢？如果是方法开发，可以从低pH开始，此时反相HPLC柱上的硅醇基发生质子化，可以最大程度避免其与碱类的相互作用；使用封端或专用柱；采用改变极性相互作用的衍生化方法，等等，逐一尝试，最终找到适合的方法~补充说明，本文中所有案例均为真实案例，但是在大家的日常工作中也可能会遇到其他不同的峰形以及不同的原因，还需具体问题具体分析！
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