HP | 专家访谈——武汉大学生命科学学院甘菲教授

文摘   科学   2024-04-03 15:00   湖北  

    我们的项目Intestide是一套肠道内短肽递送系统,通过工程菌定植在肠道中持续分泌短肽来实现。对于微生物合成生物学的实验设计、仪器和质粒构建,WHU-iGEMers还有很多疑问,因此,我们拜访了武汉大学微生物学系的甘菲教授,请她为我们指点迷津。

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专家介绍


    甘菲教授是武汉大学生命科学学院教授,主要研究领域为微生物合成生物学,其中包括:微生物能量代谢和生物合成,研究远红外光新型产氧光合作用的机理和进化;遗传密码子扩展技术,建立了以功能性替换蛋白质活性位点组氨酸来构建严格依赖于非天然氨基酸的生物体的新方法,继续发展遗传密码子扩展技术进行蛋白质功能改造及非天然生命体构建。


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访谈记录

    首先,我们向教授简要介绍了我们的项目。教授肯定了我们的设计,但同时提出了担忧:肠道环境复杂,我们构建的工程菌可能无法良好地存活,肠道动态变化不易运行我们的复杂系统。甘教授向我们提议,通过一些设计,让工程菌产生竞争优势,有助于它在肠道内竞争性生存、定植。同时,选用强启动子(T7等)会使工程菌将所有能量都用于表达蛋白而生长缓慢,这也是需要考虑的问题。



    接着,我们向老师提出了一些在项目推进中遇到的问题。

A

对于质粒构建,甘教授希望我们进一步熟悉基因结构等基础知识,向我们建议用商业化载体的序列进行对照,并且回答了我们一些关于蛋白标签选用和扩增菌选择的问题。

B

对于仪器及相关实验可行性,甘教授向我们介绍生科院的实验条件,如生科院可以做细胞分选和荧光分析,并建议我们可以进一步询问实验平台的老师。

C

对于实验设计,甘菲教授为我们提出了许多建议:可以用Western Blot或色谱定量分析蛋白表达,WB可用纯化的GST作内参,若是膜蛋白可做细胞膜提取;诱导表达蛋白的时间一般建议是对数期,可以做时间梯度实验,同时需要注意蛋白的泄露表达。



    经过近2小时的访谈,我们收获满满。再次感谢甘菲教授在百忙之中接受我们的访谈,我们也将继续完善我们的项目,努力将构想变为现实!


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文案 | 蔡恺玲

排版 | 马子涵

审核 | 2024 WHU-iGEM



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