【实验目的】
1.熟悉药物血浆半衰期（t1/2）的测定和计算方法
2.掌握t1/2的临床意义
3.掌握心脏取血方法
【实验原理】
水杨酸钠（sodium salicylate）在酸性环境中生成为水杨酸（salicylic acid），水杨酸与三氯化铁反应生成一种紫色络合物。该络合物可在520nm产生吸收峰，此时光密度值与浓度成正比。反应式如下：
【实验对象】
家兔，体重2.5～3kg，雌雄不限 。
【实验药品和器材】
1.药品 10%水杨酸钠溶液、10%三氯醋酸溶液、10%三氯化铁溶液、0.5%肝素生理盐水等。
2.器材 722分光光度计、离心机、离心管（10ml×4）、移液器（10ml×1）、试管×8、试管架、记号笔、兔台、注射器（5ml×2）等。
【实验步骤】
1．打开分光光度计，预热；取离心管4只，标号后分别加入10％三氯醋酸7ml
2．取兔一只，称重后固定在兔手术台。
3．0.5%肝素生理盐水湿润注射器，心脏取血2ml，加入对照管（1号），摇匀静置
4．耳静脉注入10%水杨酸纳溶液1.5m/kg（150mg/kg）。给药后开始计时。
5．药后立即、15、30分钟各取血2ml加入2、3、4号管，摇匀静置。
6．各管配平离心5分钟（1500-3000转/分），准确吸取上清液6ml分别放入另一组对应已标号试管中，分别加入10％三氯化铁0.5ml或12滴，摇匀显色。
7．测定：在分光光度计520nm波长以1号管为对照测定其余各管的光密度值。
8．计算t1/2
（1）由标准管的光密度值（Y），浓度（X）求比值K，K＝X／Y；再根据X＝KY，由Y1、Y2、Y3、Y4求其余各管的浓度X1、X2、X3、X4。代入下式求半衰期
t1/2= | 0.301 |
（lgx1-lgx2）/△t |
注：式中X1、X2分别为血药浓度值，Δt为两次取血间隔时间
（2）将各时间点与其对应的水杨酸的浓度填入BL-420N生物机能实验系统半衰期的统计表格，计算机将自动计算出t1/2。
（3）作图法求t1/2 在半对数坐标纸上，以时间为横坐标，血浆药物浓度的对数值为纵坐标作出药-时曲线，在此曲线上找出血浆药物浓度下降一半所对应的时间即为该药的半衰期。
10．加样及实验结果记录 按表4-18操作
表4-18 加样及实验结果记录表
药 前 药 后 （对照管） （0min）（15min）（30min） |
10%三氯醋酸 7 ml 7ml 7ml 7 ml 血 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml |
离心5分钟（1500-3000转/分） |
| 试管 1号管 2号管 3号管 4号管 |
上清液 6.0ml 6.0ml 6.0ml 6.0ml 10%三氯化铁 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml OD值 血药浓度 |
t1/2 |
【实验注意事项】
1．每只离心管或试管应提前标号
2．心脏取血
（1）每次心脏取血前必须用0.5%肝素润洗注射器，防止凝血，每次取血完成后应立即清洗注射器及针头。
（2）心跳最明显（一般位于胸骨左缘3～4肋间）的肋间隙垂直进针，不得斜向或滑动，如第一次没有成功取血，应取出采血针，放开家兔，稍待片刻，再行采血。
（3）采血针头选用7—8号针头，以免发生采血后穿刺孔出血，取下针头将血推入离心管，以防溶血。取血量要准确。
3．耳缘静脉注射水杨酸钠时应小心谨慎，因水杨酸钠刺激性强，家兔易动，故需稳妥固定。
4．每吸取一个试剂时，必须更换吸量管。加试剂的吸量管不要触及样品
5．比色杯应用离子水冲洗保持清洁，1号管为对照管第1次测完后不要倒掉
6.移液器的量程为2-10ml，请不要超出量程范围使用，因为是新枪，请在使用前按压几次，使用过程中按下去放的时候一定慢慢放开，以防止液体冲进枪里损坏移液器。
【思考题】
测定药物的半衰期有何临床意义？
