本期视频介绍了WB样品制备时裂解液与抑制剂的选择。不同的目的蛋白可能位于细胞膜、细胞质、细胞核、细胞核膜、亚细胞成分等位置，因此需要选择适合的裂解液才能获取最大受体率。
常用的裂解液如瑞帕裂解液可以获得总蛋白，但如果想获得亚细胞组分的蛋白则需要尝试特定的膜蛋白抽提试剂盒或核蛋白抽提试剂盒，以及先分离出线粒体再进行裂解。
裂解前需加蛋白酶抑制剂以防止蛋白降解，常用的有PMSF等经济实惠的抑制剂，如果样品涉及磷酸化蛋白则需在加蛋白酶抑制剂的同时加磷酸酶抑制剂，常用的磷酸酶抑制剂有焦磷酸钠、盐酸酸钠等。
亮点：
裂解液选择：不同的目的蛋白位于不同的位置，需选择适合的裂解液获取最大受体率。
抑制剂选择：常用的PMSF具有较好的抑制效果以及经济实惠，商品化的蛋白酶抑制剂混合物抑制更加广泛。
磷酸酶抑制剂选择：根据想要抑制的磷酸酶类型选择合适的抑制剂，如果不确定则可选择商品化的磷酸酶抑制剂混合物。
[视频版本]
往期文章
手把手教学——WB条带量化之ImageJ软件分析
exdrive.cn
公众号、视频号、知乎、Bilibili
抖音、西瓜、今日头条、小红书
内容同步
