背景
裸鼠皮下成瘤实验用于研究肿瘤的形成、发展以及针对肿瘤的治疗方法。裸鼠是一种缺乏免疫系统的小鼠品种，因此能够更容易地接受移植的异种组织，比如人类肿瘤细胞。在这种实验中，通常会将人类肿瘤细胞注射到裸鼠的皮下组织中，形成肿瘤。然后观察肿瘤的生长情况、病理学特征以及对治疗方法的反应。
此实验通常用于评估潜在的抗肿瘤药物、免疫治疗方法或其他治疗策略的有效性。通过在裸鼠模型中进行实验，可以更好地理解肿瘤的生物学特性，并为临床治疗提供重要的参考依据。
实验步骤
1、准备工作：准备对数期生长的、细胞密度达80-90%左右的肿瘤细胞。
2、细胞收集：弃掉旧培养基，用PBS清洗细胞1-2次（去除细胞中的血清），使用胰酶消化细胞，制备成细胞悬液，离心，去上清，接着用PBS或者无血清培养基重悬细胞并进行细胞计数，计算所需的终浓度。通常皮下瘤接种时，使用的细胞量为每支1-5×106个细胞，接种体积为0.1毫升，因此细胞悬液的浓度约为1-5×107个细胞/ml。
3、裸鼠接种：用左手固定裸鼠后，在其左侧腋窝处进行皮下注射。注射时，将针头深入皮下约1厘米，注射体积为100微升在接种过程中，应将细胞悬液放置在冰上，以减缓细胞凋亡。
4、接种后处理：接种完成后将裸鼠放回其笼中继续进行饲养，大约1周后可以观察到肿瘤的形成。根据实验设计，在肿瘤体积未超过1000mm³之前，需要对裸鼠进行安乐死，并取出肿瘤进行后续处理，如取瘤子拍照或活体成像。
如图为裸鼠成瘤实验结果示例（对照组与处理组）：
注意事项
1、细胞在指数生长阶段收集非常重要，因为细胞状态对细胞系移植后的活力有着极大的影响。如果发现细胞系在异种移植形成的肿瘤活力较差，可以考虑使用Matrigel作为注射混合物，为植入提供丰富的基质环境。
2、在接种时，针头应深入皮下约1厘米，以减少注射后细胞悬液从针眼溢出的可能性。注射时，针头应向前方穿行，且在注射前轻微移动针头，以确保针头处于皮下。如果针头能够移动，则表明它在皮下位置，否则可能在皮内或肌肉内。
3、注射前，一定要排去针管内的空气。
4、每天监测裸鼠的存活和肿瘤生长是非常重要的，通常需要测量肿瘤的最大（L）和最小（W）长度。一般来说，大约一周左右就可以观察到米粒大小的肿瘤。
5、细胞消化后应立即移植到裸鼠皮下，最好在30分钟内完成。在过程中，将细胞悬液置于冰上以减缓细胞代谢。
6、在接种前，使用枪将细胞悬液充分吹散，以确保细胞均匀分散，防止细胞聚集并降低其存活率。
7、要注意伦理问题，为避免肿瘤过度生长，一般不建议超过1000 mm3。
8、取下瘤子后，将一部分冻存于液氮中，以备将来提取蛋白质和RNA使用；另一部分则用福尔马林固定，用于免疫组化、免疫荧光等实验。
本文作者是"小米"同学，在获得授权后，实验老司机将本文发表于公众号。
文稿：小米
校对：煲仔饭
素材：Canva
参考资料：
Zhang X, Lao M, Xu J, Duan Y, Yang H, Li M, Ying H, He L, Sun K, Guo C, Chen W, Jiang H, Zhang X, Bai X, Liang T. Combination cancer immunotherapy targeting TNFR2 and PD-1/PD-L1 signaling reduces immunosuppressive effects in the microenvironment of pancreatic tumors. J Immunother Cancer. 2022 Mar;10(3):e003982. doi: 10.1136/jitc-2021-003982. PMID: 35260434; PMCID: PMC8906048.
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