土壤微生物碳利用效率CUE实验方法、实验材料、仪器设备简介(附视频介绍)

学术   2024-11-11 08:01   江苏  
微生物碳利用效率的测定

一、微生物碳利用效率的概念及其环境意义

微生物碳利用效率(CUE):微生物分配给生长的碳量占吸收总碳量的比率,体现了微生物合成代谢和分解代谢之间的平衡。其间接决定了微生物残体碳的积累,有助于从微生物代谢角度理解土壤碳动态。


二、实验材

18O标记水(97%或98%)、灭菌蒸馏水、银杯、50mL顶空瓶、12mL顶空瓶、2mL冻存管、土壤DNA提取试剂盒、移液枪、灭菌枪头、96孔板等。


三、主要仪器设备

涡旋仪及配套适配器;高速离心机、真空泵、超微量分光光度计、百分之一天平、万分之一天平、百万分之一天平、烘箱、恒温培养箱、TOC分析仪、气相色谱仪、同位素质谱仪。


视频| CUE实验流程介绍

18O-H2O培养法流程介绍

01

试样的准备

收集200g左右田间土壤样品,混匀,将其中的大约100g土壤鲜样通过2mm 孔径筛,去除石头和肉眼可见的根等杂质,装入聚乙烯样品袋备用。 


02
预培养

●土壤野外采回后迅速过2mm筛,去除土壤内石块、根系、凋落物等;

●烘干法测量土壤含水量土壤;

●尽快将过筛后土壤熏蒸浸提法测量微生物MBC;

(1) 田间持水率的测定

调整土壤含水量到60%田间持水量(WHC,water holding capacity);

将土壤放入实验所需温度培养箱进行预培养,预培养时间遵照实验设计。

(2)预培养土样控水处理。


03
18O标记培养

一个样本一个对照组,或根据样本情况挑选20%样品做对照。


04
土壤DNA的提取

野外采集土壤带回实验室迅速分装冻干提取DNA,并测得DNA含量。


05
DNA浓度测定

 DNA提取液上机测定DNA提取液浓度,并记录数据。


06
18O丰度测定

吸取DNA提取液于洁净的银囊(已称重)中并置于60℃烘箱中干燥整夜后(称重)包好,用质谱仪测定18O丰度和总氧含量。


07
MBC测定

氯仿熏蒸提取法...


08
计算

......

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-end-

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(实验室部分环境拍摄)

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—特色检测指标—

土壤、植物酶活检测

氨基糖、PLFA及其同位素、磷组分

木质素酚CUE、有机氮组分、有机酸

氨基酸、微生物量碳氮磷同位素

苯多羧酸、红外光谱、微生物多样性等

其他土壤、植物、水体等常规检测指标均可测定

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