一、实验原理：
Trizol试剂的主要成分是苯酚，对细胞进行裂解，使细胞中的蛋白质以及核酸物质解聚。苯酚虽然可以有效的使蛋白质变性，但它不能完全抑制RNA酶的活性，因此Trizol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（即RNA酶）。存放在Trizol 中的样品可以在负八十保存半年左右。
二、样本处理方法：
贴壁培养细胞
1. 吸出培养液，细胞用预冷的1×PBS清洗两次。
2. 吸出PBS洗液，然后每1×10^8-2×10^7的培养细胞中加入1mL的Trizol，轻摇培养皿，确保溶液均匀分布于细胞表面。（可用细胞刮刀剥离细胞）
3. 使用移液器反复吹打使细胞脱落，然后将内含细胞的裂解液转移至离心管中，再用移液器吹打直至裂解液中无明显沉淀（溶液清亮）。
4. 室温静置5-10分钟后，再进行后续的RNA提取操作。
悬浮培养细胞
1. 将悬浮细胞收集至离心管中，12000rpm 4℃离心2分钟，弃上清，用预冷的1×PBS清洗两次。
2. 向1×10^6-2×10^7细胞中加入1mL的Trizol。
3. 用移液器吹打至裂解液清亮无明显沉淀。
4. 室温静置5-10分钟后，再进行后续的RNA提取操作。
动物组织、植物材料样品
1. 将准确称取的RNA提取样品转移液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织（研磨过程中需要不断向研钵中补加液氮），直至研磨成粉末状，然后向粉末中加入适量的Trizol并混匀。（针对柔软易裂解的组织样本，可以使用匀浆器加入适量Trizol进行匀浆裂解。）
2. 将上述混合液转移至离心管中，用移液器反复吹打充分混匀。室温静置5分钟，12000rpm 4℃离心5-10分钟。
3. 小心吸取上清液，移入新的离心管中，再进行后续的RNA提取操作。
三、操作步骤：
（1）样本前处理。
（2）向上述裂解液中加入Trizol体积量1/5氯仿，充分混合（涡旋或用枪头混匀）。室温静置15分钟。
（3）12000rpm 4℃离心15分钟。小心取出离心管，此时匀浆液分为三层，即：上清液（含RNA）、中间蛋白层及下层有机相。吸取上清液转移至另新的离心管中。
注：每管大概取 200-300μL，此步骤非常关键，提出的RNA质量好纯度高即可。若吸取水相时吸到有机相会导致双峰，A260/230特别低。
（4）沉淀 RNA：向其中加入相同体积异丙醇，上下颠倒混匀。在-20℃放置10mins。12000rpm 4℃离心10mins后弃去上清。
（5）清洗 RNA：向沉淀中加入500μL预冷的无水乙醇，吹散沉淀洗涤RNA，洗涤两次，12000rpm 4℃离心后弃去上清。
注：把沉淀弹起来，让其悬浮在酒精中，然后放1-2mins，让酒精充分接触沉淀，充分溶解有机试剂，然后再离心。
（6）打开离心管，室温干燥沉淀约5分钟。
注：不要离心干燥，否则RNA将很难溶解，如果残留乙醇较多可延长干燥时间。
（7）向离心管中加入20μL DPEC水溶解RNA。将溶解后的RNA放入-80℃保存。
注：如果提取的是组织样本，溶解液可以多加点。
（8）取2μL进行电泳。
四、注意事项：
1. 防止RNA酶污染。
戴好口罩，手套。 全程最好在生物安全柜操作（根据实验条件） 实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必须确保RNase-Free。耗材均需要通过DPEC处理。
2. 明确目标。
提取成功标准是RNA的质量和纯度，而不是得率。
3. 测量结果：
A260/A280：1.8-2.2，若<1.8则表明有蛋白质污染；
A260/A230：1.5-2.4，若<1.5则表明有明显的有机物如糖、肤、苯酚的污染。
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