什么?隔壁实验室的师妹不仅找到了靶点还发了一篇很高分的文章!她是怎么做到的?秉着不懂就问的原则,闪现到她面前问个究竟。
她说多亏了那个工具筛选出了大量候选靶点,效率很高,实验数据也得心应手!
谜底揭晓了,这个工具是CRISPR文库,原来它这么好用啊。
CRISPR文库是基于CRISPR/Cas9技术建立的高通量基因筛选方案。
相比cDNA文库与RNAi文库,CRISPR/Cas9具有多功能性、低噪声、高敲除效率和较小的脱靶效应的优势,是大规模基因功能筛选的首选平台。
很想追热点,但全筛外包好像经费不允许,那买质粒or病毒自己筛?但工作量太大了...
不不不,现在好消息来了!
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源井一站式文库构建筛选服务,躺平也能找到靶点,真的不来体验一下吗?!
一站式文库构建筛选服务
针对某个物种,每个基因设计3-6条sgRNA,采用高通量芯片合成sgRNA,再将合成的sgRNA通过Gibson组装克隆到慢病毒载体中。
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源井服务亮点:
①红棉CRISPR基因编辑系统:高通量自动化设计gRNA,确保gRNA特异性和切割效率。
②确保高转化效率:使用自主研发的超级感受态,并采用电转的方式提高转化效率,严格把控长菌数量≥500X,确保转化效率。保证文库覆盖度>99%、均一性<10。
将质粒文库包装成慢病毒,并以低MOI(一般标准<0.3)感染靶细胞,保证一个病毒颗粒感染一个细胞。细胞文库中包含的细胞的数量一般为全部sgRNA数量的200-1000倍。
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源井服务亮点:
③丰富的慢病毒包装经验:确保病毒滴度和纯度及混合质粒病毒包装过程的均一性。
④近100种Cas9稳转株现货:省去Cas9病毒感染环节,文库筛选周期缩短3-5周。
将全基因组敲除细胞库分成两份,其中一份作为实验组施加筛选压力,如:病毒侵染,药物治疗等;另一份作为对照组。根据耐药性、增殖能力、存活能力等表型筛选细胞。
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源井服务亮点:
⑤经验丰富平台完善:丰富的细胞培养经验和完善的下游表型分析平台,可以提供多种细胞筛选服务。
将实验组和对照组的细胞分别抽提基因组,PCR扩增sgRNA片段,进行NGS测序,并进行生物信息学分析。
通过CRISPR/Cas9敲除单个候选基因,或进行过表达/回补实验,进行基因功能验证。
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源井服务亮点:
⑥CRISPR-U™细胞基因编辑平台:已在超200种细胞上积累5000+成功案例,提供基因功能验证服务,保证交付KO纯合克隆。
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