采用组织块法和酶消化法分别分离牛脂肪细胞和骨骼肌细胞。利用表型鉴定法和标志基因表达谱鉴定法共同鉴定所分离细胞的纯度和分化潜能，进一步构建牛骨骼肌细胞和牛脂肪细胞条件培养基交换共培养体系以及Transwell共培养体系，通过实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）、EdU染色和油红O染色等方法检测共培养条件下牛骨骼肌细胞分泌和代谢产物对脂肪细胞增殖和分化的影响。
牛骨骼肌细胞的分离、培养与鉴定
成功构建了两种牛骨骼肌细胞与脂肪细胞的共培养体系。
条件培养基交换共培养下，牛脂肪细胞增殖标志基因PCNA、CDK2、CCNE2和CCND1的表达极显著下调（P<0.01）；此外，成脂标志基因FABP4和PPARγ的表达显著下调 （P<0.05）；LPL的表达极显著下调（P<0.01）。
另一方面，在Transwell共培养条件下，牛脂肪细胞增殖标志基因CCND1的表达显著下调（P<0.05）；PCNA、CDK1和CCNE2的表达极显著下调（P<0.01），且成脂标志基因FABP4的表达显著下调（P<0.05），PPARγ、C/EBPβ和LPL的表达极显著下调 （P<0.01）。
牛骨骼肌细胞分泌和代谢产物可通过抑制脂肪细胞增殖标志基因PCNA、CDK1、CDK2、CCNE2和CCND1以及成脂标志基因PPARγ、FABP4、C/EBPβ和LPL的表达抑制牛脂肪细胞的增殖与分化。以上研究结果可为进一步探究肉牛肌内脂肪沉积的分子机制提供技术支撑。
该研究获得“西部之光”人才培养计划（2024）、国家自然科学基金（32060744，32202641）、中央引导地方科技发展专项（2024FRD05052）、动物科学国家一流本科专业、宁夏大学奶业现代产业学院资助项目的资助。
引用本文：
杨东梅, 张久盘, 宋雅萍, 宋小雨, 姜超, 马云, 魏大为. 共培养体系下牛骨骼肌细胞对脂肪细胞的调控作用研究[J]. 中国农业科学, 2024, 57(18): 3704-3718.
YANG DongMei, ZHANG JiuPan, SONG YaPing, SONG XiaoYu, JIANG Chao, MA Yun, WEI DaWei. Research on the Regulatory Effects of Bovine Skeletal Muscle Cells on Adipocytes Under Co-Culture Conditions[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2024, 57(18): 3704-3718.
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