该研究通过解剖柑橘木虱唾液腺、中肠、卵巢和精巢组织，根据木虱DcMcuin-like序列设计特异性引物，利用实时荧光定量PCR检测分析各组织中DcMcuin-like在转录水平的差异；扩增无信号肽的DcMucin-like序列并插入pET-28a中构建重组质粒，测序验证后转化Rosetta表达菌株，以终浓度0.5 mmol·L-1 IPTG在37 ℃下振荡培养8 h诱导重组蛋白表达，SDS-PAGE凝胶电泳检测重组蛋白表达情况；扩大培养后裂解菌体，裂解液上清经Ni-NTA纯化作为抗原免疫家兔5次，纯化血清IgG获得DcMucin-like多克隆抗体，Western blot检测抗体特异性；利用实时荧光定量PCR和Western blot比较健康木虱和感染黄龙病菌（Candidatus Liberibacter asiaticus，CLas）木虱中DcMucin-like在转录水平和蛋白水平的差异；利用交联荧光素（FITC）的DcMucin-like多克隆抗体标记木虱取食后的柑橘叶片，在共聚焦显微镜下观察柑橘木虱取食孔和唾液鞘。
DcMucin-like在柑橘木虱不同组织中的表达
SDS-PAGE（A）和Western blot（B）检测重组质粒在大肠杆菌Rosetta中的表达
Western blot检测抗DcMucin-like血清（A）和IgG（B）特异性
实时荧光定量PCR（A）和Western blot（B）分析柑橘木虱感染黄龙病菌后DcMucin-like的差异表达
DcMucin-like随木虱取食分泌到植物中参与唾液鞘形成
综上，DcMucin-like在柑橘木虱唾液腺中高表达并响应黄龙病菌侵染上调表达；成功制备了特异性好的柑橘木虱DcMucin-like多克隆抗体；验证了DcMucin-like随木虱取食分泌到柑橘植株组织中。研究结果可为深入探究DcMucin-like在黄龙病菌-木虱-柑橘三者互作中的作用打下基础。
福建农林大学植物保护学院宾羽为该文通信作者，蒋丽琴为该文第一作者。
该研究获得国家自然科学基金青年科学基金项目（32402347，32202395）、福建省自然科学基金面上项目（2022J01577）的资助。
引用本文：
蒋丽琴, 苏巧灵, 李猷, 魏太云, 宾羽. 柑橘木虱黏液样蛋白DcMucin-like抗体制备及应用[J]. 中国农业科学, 2025, 58(2): 281-290.
JIANG LiQin, SU QiaoLing, LI You, WEI TaiYun, BIN Yu. Preparation and Application of DcMucin-like Antibodies in Diaphorina citri[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2025, 58(2): 281-290.
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