上篇文章＜藤仓胶乳微球产品特性介绍＞介绍到了藤仓胶乳微球产品的三大特性：
①批次间再现性优异
②粒径分布范围宽广
③不同分散性的3种系列（化学结合型）
本篇文章继续介绍由藤仓公司结合自身胶乳试剂的开发经验，为物理吸附微球及化学结合微球制定的抗体包被标准流程，共计3种，供大家参考。
值得一提的是，为了防止在包被和封闭过程中发生凝集，以及达到更好的试剂性能，厂家建议EDC和抗体添加量不要过量，大家可以在厂家给定的参数附近进一步优化提升。3种参考包被流程如下：
物理吸附微球抗体包被流程示例
＜离心法＞
材料
◆聚苯乙烯胶乳微球(10wt%浓度)
◆包被缓冲液：10 mM HEPES (pH 7.0)
(甘氨酸硼酸缓冲液、或磷酸缓冲液均可、pH 7～9酌情调整优化）
◆抗体：精制抗体/PBS
◆封闭溶液：10wt%BSA
◆试剂保存液：0.1wt% BSA/10 mM HEPES-NaOH (pH7.0)/10%蔗糖/0.09%NaN3 etc…
抗体包被示例*
1）向1.5～2mL的离心管中加入950μL标记缓冲液，及50μL的10wt％羧基乳胶微球原液，将胶乳微球稀释至0.5wt％（乳胶微球浓度为 5mg/mL）。
2）参考下表添加适量的抗体，在25℃下进行一小时的颠倒混合。
3）参考下表离心并除去上清液。
4）添加包被缓冲液1350 μL，以及封闭液150 μL，使用超声波装置重新分散微球，在42℃下进行一小时的颠倒混合。
5）离心并除去上清液。
6）添加试剂保存液，再次使用超声波装置分散微球，然后将包被好的微球调整至所需浓度以获得试剂性能。
*用于抗体包被的胶乳微球的配制量可以根据需要扩大规模。扩大规模时，适当延长各反应时间(抗体包被、封闭、离心时间)。
化学结合胶乳微球抗体标记反应例①
＜离心法＞
材料
◆羧基胶乳微球(10wt%)
◆抗体包被缓冲液：10 mMHEPES (pH 7.0)
(不可使用含有氨基的缓冲剂)
◆抗体：精制抗体/PBS
◆EDC缩合剂：WSC (株)同仁化学研究所 产品编号：348-03631
◆封闭溶液：10wt%BSA
◆试剂保存液：0.1wt%BSA/10 mM HEPES-NaOH (pH7.0)/10%蔗糖/0.09%NaN3 etc…
抗体包被示例*
1）向一个1.5～2mL的离心管中加入950μL标记缓冲液，及50μL的10wt％羧基乳胶微球原液，将胶乳微球稀释至0.5wt％（乳胶微球浓度为 5mg/mL）。
2）用标记缓冲液溶解EDC（浓度为10mg/mL），然后适量添加到乳胶稀释液（1mL）中。
3）在25℃下使用旋转器进行20分钟的颠倒混合。
4）参考下表添加适量的抗体，在25℃下进行一小时的颠倒混合。
5）参考下表离心并除去上清液。
6）添加包被缓冲液1350 μL，以及封闭液150 μL，使用超声波装置分散微球，在42℃下进行一小时的颠倒混合。
7）离心并除去上清液。
8）添加试剂保存液，再次使用超声波装置分散微球，然后将包被好的微球调整至所需浓度以获得试剂性能。
*用于抗体包被的胶乳微球的配制量可以根据需要扩大规模。扩大规模时，适当延长各反应时间(抗体包被、封闭、离心时间)。
化学结合胶乳微球抗体标记反应例②
＜一步法＞
材料
◆羧基胶乳微球(10wt%)
◆抗体包被缓冲液：10 mMHEPES (pH 7.0)
(不可使用含有氨基的缓冲剂)
◆抗体：精制抗体/PBS
◆EDC缩合剂：WSC (株)同仁化学研究所 产品编号：348-03631
◆封闭溶液：10wt%BSA
◆试剂保存液：0.1wt%BSA/10 mM HEPES-NaOH (pH7.0)/10%蔗糖/0.09%NaN3 etc
抗体包被示例*
1）向一个1.5～2mL的离心管中加入950μL标记缓冲液，及50μL的10wt％羧基乳胶微球原液，将胶乳微球稀释至0.5wt％（乳胶微球浓度为 5mg/mL）。
2）用标记缓冲液溶解EDC（浓度为10mg/mL），然后适量添加到乳胶稀释液（1mL）中。
3）在25℃下使用旋转器进行20分钟的颠倒混合。
4）适量添加抗体，在25℃下进行一小时以上的颠倒混合。
5）加入150 μL封闭缓冲液, 在42℃下进行一小时的颠倒混合。
6）添加试剂保存液，然后将标记好的微球调整至所需浓度以获得试剂性能。
*用于抗体包被的胶乳微球的配制量可以根据需要扩大规模。扩大规模时，适当延长各反应时间(抗体包被、封闭时间)。
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