免费资源：
一、国自然类：
5 标书写作模板
2 2018-24年国自然清单
4 基金插图素材（可编辑）
5 泛癌分析万能代码
7 130套SCI实验视频
9 单细胞数据挖掘课
11 统计分析万能模板
2 100个SCI实验Protocol
10 SCI写作万能模板
9 资源共享群
10 相亲交友微信群
衰老的男性表现出生殖健康下降；然而，在分子和基因组水平上，人们对睾丸衰老知之甚少。该文章利用单细胞RNA-seq分析了44,000多个来自年轻和老年男性的睾丸细胞，探究了衰老对生殖细胞发育和睾丸体细胞的影响。
基于单细胞数据比较了老年组和年轻组的每个主要睾丸细胞类型在衰老过程中的转录变化，揭示人类睾丸衰老的一系列分子机制。
1.样本及数据信息
作者收集了八名老年(>60岁)和四名年轻(17-22岁)的男性的睾丸组织进行10x单细胞转录组测序。，在组织学上，所有年轻的睾丸都观察到成熟精子的发生，然而老年组有三个睾丸样本发现了明显的生精受损。12个样本scRNA-seq共有44,657个细胞(年轻的13,156个细胞，老年的31,501个细胞)通过了质量控制并进行了分析。基于细胞类型特异性标记基因的表达，确定了体细胞和生殖细胞类型，包括：支持细胞、巨噬细胞、内皮细胞、间质细胞、管周细胞、平滑肌细胞、未分化和分化精原细胞、精母细胞和减数分裂后精子细胞。
2.精原细胞衰老的分析
为了了解生殖系在衰老过程中的变化，作者对生殖细胞群进行了进一步分析。首先根据标记基因将生殖细胞发育分为7个阶段（精原干细胞SSCs，分化精原细胞，早期初级精母细胞，晚期初级精母细胞，精子圆细胞，延长型精子细胞和长形精子细胞）。然后分析了每个样本中各类生殖细胞亚型的占比，其中来自老年组的3个睾丸样本中，仍观察到中等数量的未分化SSCs，而进一步发育的生殖细胞类型高度减少，表明生殖细胞分化受到衰老的异质性影响。为了进一步探索睾丸老化和衰老导致的男性亚生育的潜在分子机制，作者将老年样本分为两组：组织学上精子发生正常的为老年组1，精子发生明显缺陷的为老年组2。
接下来作者通过免疫荧光染色发现，精原干细胞SSCs的丰度在年轻组和老年组1之间没有变化，但在老年组2中显著下降，表明衰老相关的生精功能缺陷可能是由于SSCs的数量减少。最后，作者进行了异种移植实验，以评估老年精原细胞对年轻精原细胞的定植潜力。结果发现异种移植2个月后，三组患者的平均移植效率大致相当。与年轻组相比，老年组的克隆形成潜力的差异更大。观察人精原细胞集落形成情况还发现，尽管年轻组和老年组1没有显著变化，但老年组2的细胞数明显低于年轻组和老年组1，这表明老年组2的精原细胞扩张能力下降。
3.睾丸体细胞的转录变化及体细胞与生殖细胞相互作用
为了了解体细胞在衰老过程中的变化，作者探究了每种体细胞类型中的差异表达基因（DEG）。作者重点关注了两种及两种以上的体细胞类型共有的DEG。对共有的上调基因和下调基因分别进行功能富集分析，发现上调基因显著在炎症相关的GO term中显著富集。其中TIMP1(炎症网络中的一种分泌蛋白)，IL6ST，IL6受体和IFITM2/3的表达从年轻组到老年组1再到老年组2逐渐变化，即与亚生育相关的基因在老年组1中表现出中度失调，在老年组2中表现出更强的失调。然后作者对TIMP1染色进行了实验验证。总之，这些结果表明炎症是睾丸体细胞老化的共同特征。
然后，作者基于CellChat分析探究了细胞间的相互作用。结果发现年轻和老年睾丸之间的相互作用强度从年轻组到老年组1再到老年组2依次减弱。特别是，与年轻组相比，老年组2中SSCs与体细胞的相互作用次数和相互作用强度较低。例如，在老年组2中，支持细胞(配体)和SSCs(受体)之间的激活素信号通路减少。值得注意的是，激活素信号可能有助于调节SSC的自我更新和分化。支持细胞(配体)和分化的精原细胞(受体)之间的KIT信号通路减少，这一通路也已知在维持SSCs自我更新和分化的平衡中发挥关键作用。此外，与免疫系统相关的信号通路在衰老过程中也发生了变化，包括老年组巨噬细胞中MIF信号通路的减少和补体信号通路的增加。这些结果表明，睾丸体细胞信号在衰老过程中发生了对生殖细胞发育不利变化。
4.支持细胞在衰老过程中表现出炎症和代谢紊乱
为了探索支持细胞在衰老过程中的变化，作者对支持细胞群进行了进一步分析。拟时序分析发现来自老年组2的支持细胞位于轨迹的末端，老年组1的细胞沿轨迹分布。结合拟时序和差异分析发现，分化末端的支持细胞中上调的基因富集了与炎症相关的GO term，下调的基因富集了与代谢相关的GO term。为了验证结果，作者进行了免疫荧光(IF)染色和蛋白质印迹分析，发现老年组2的支持细胞中HMGCS2和PSAT1的表达显著减少。通过支持细胞标记SOX9染色发现与年轻组相比，老年组1和老年组2的支持细胞数量都显著下降。支持细胞标记SOX9和生殖细胞标记DDX4共同染色发现年轻组的生殖细胞与支持细胞的比率与老年组1相似，而老年组2的比率显著下降，表明老年组2的支持细胞存在功能缺陷。总之，这些结果表明，支持细胞的丧失和代谢功能的减弱都可能影响老年男性的精子发生。
5.间质细胞在信号、睾酮和发育特性方面表现出失调
同样的方法，作者又探究了间质细胞特异表达的基因及功能通路。发现老年间质细胞上调基因在很大程度上与平滑肌收缩、生长抑制和活性氧(ROS)有关。然后同样用免疫荧光验证了间质细胞标记物（Cyp11a1）和关键蛋白（Ptch1）的表达。接下来，作者通过Cyp11a1的IF染色量化了三组间质细胞的数量，观察到在衰老过程中间质细胞数量显著减少。最后作者进行功能验证实验，通过体外培养睾丸组织，用刺激睾酮产生的激素处理，评估衰老的间质细胞产生睾酮的能力。结果发现，同样重量的组织在老化过程中含有较少的间质细胞，而且与年轻组相比，老年组2的睾丸素显著下降，而GSEA分析没有得出与类固醇生成相关的途径，这表明老年间质细胞总睾酮产量的下降更有可能与间质细胞数量的减少有关，而不是单个间质细胞睾酮产量的不足。
6.睾丸管周细胞，内皮细胞和巨噬细胞在衰老过程中的分子及功能特征
为了探索其它类型细胞在衰老过程中的变化，同样的分析（差异分析，功能富集分析，免疫荧光实验）分别对管周细胞（TPCs），内皮细胞和巨噬细胞又来一遍。分析结果就是：（1）与年轻组相比，在两个老年组样本的TPCs中观察到炎症相关通路失调；细胞周期及 细胞死亡相关基因表达上调，平滑肌收缩相关基因表达下调；TPCs细胞数量明显增加。得出的结论是衰老的TPCs显示生精小管壁的完整性及收缩能力受损，导致腔内精子运输的能力失调。（2）在老年组的内皮细胞中上调的基因在“抗原处理和呈递”GO term中显著富集，表明内皮细胞参与了睾丸免疫动态平衡。下调基因在“血管发育”和“血管生成调节”GO term中显著富集。考虑到血管系统在精子发生中的关键作用，这个结果表明，内皮细胞可能在一定程度上导致了老年组2的生精失败。（3）老年组的巨噬细胞表现出抗原提呈减少，对未折叠蛋白的反应增加（内质网应激）的特征。
7.老年男性的生精模式与他们的BMI显著相关
上述结果可知，老年组1和老年组2在生理学和基因组学特征上有明显的不同，接下来作者又基于患者临床特征进一步寻找可能影响他们生育能力的相关因素。结果发现包括低BMI和高BMI的所有年轻组供者都显示出正常和成熟的精子生成。而生精正常的老年第1组的供者的BMI都很低(<27)，而所有来自老年第2组的供者的BMI都较高(>30)。该结果根据BMI状态对老年捐赠者进行了划分，并在高BMI(>30)的老年捐赠者中观察到了明显的失调。
（1）研究了每个主要睾丸细胞类型在衰老过程中的转录变化，揭示了人类睾丸衰老的一系列分子机制；
（2）该研究提供了关于衰老可能如何与其他同时存在的因素(如BMI)相结合来影响人类睾丸中的生殖细胞和支持体细胞的重要见解；
（3）揭示了诊断睾丸老化的潜在生物标志物，并为与衰老相关的不育症的潜在治疗提供了方向。
不管你是一个样本的单细胞测序数据分析，还是两个分组多个样本的单细胞数据分析。这一套视频都合适（10X），这套课程适合入门到精通的同学。
它就是一整个数据操作从头到尾，只要你跟着这个实操视频操作到尾，分分钟自己也能会单细胞数据分析：
【单细胞RNA测序分析实操课（附代码+课件+视频，原价16799元）】
长按下方二维码关注
回复关键词：231125
回复关键词：231125
回复关键词：231125
此外，最近，有很多粉丝留言说分享一下历年的国自然标书。可以参考大佬的热点分子、研究套路和写作套路，以及图表的绘制，等等。靠着大佬的标书走，心里有底。所以，今天，科研部给大家免费分享：
“近10年国自然基金8个学部标书合集(原价2万元)”
长按下方二维码关注
回复关键词：231021
回复关键词：231021
回复关键词：231021
这是我们内部国自然培训用的，原价2万多，8.66GB：
涵盖近10年（21、22、23年的标书尤其珍贵，大家一定要好好收藏），8个学部：
部分截图如下：医学科学部（部分截图）：
再如生命科学部（部分截图）：
赶紧下载，免费送给大家的：
“近10年国自然基金8个学部标书合集(原价2万元)”
长按下方二维码关注
回复关键词：231021
回复关键词：231021
回复关键词：231021
再如地球科学部（部分截图）：
工程与材料部（部分截图）：
管理科学部（部分截图）:
化学科学部（部分截图）:
数理科学部（部分截图）：
信息科学部（部分截图）:
这些标书我已经上传百度云了，需要的赶快保存起来：
【近10年国自然基金8个学部标书合集(原价2万元)】
长按下方二维码关注
回复关键词：231021
回复关键词：231021
回复关键词：231021
以前对于循证医学有个很模糊的印象，只知道他是一门在临床中遇到问题后，去数据库查一些资料，然后从诊断、治疗、经济、人文等方面。给患者提供治疗方案，从患者角度出发的医疗思维方法。
今年3月份，因为需要写一篇关于meta分析的论文，所以，开始大量阅读书籍。下面是我的学习过程。里面有很多菜鸟级的经验教训。请高手多指导。
1，先下载别人写好的meta分析的论文，看看人家是怎么写的。看范文和跟着教学视频实操（文末已经分享给大家，可免费获取）。
掌握了meta分析的常规格式，但是对于数据时怎么来的，森林图和漏斗图怎么分析，真是头疼啊！
2，研究revman。
因为着急写论文，白天还得去临床，所以每天早晨4点就爬起来研究这个英文软件，很是头疼。最开始我用的是4.2版本的，研究了足足5天啊，但是怎么的都出不来图。后来经高人指点，改成了5.0版，马上就解决了。在研究revman的时候，还要感谢万能的丁香园啊，里面有各种的教程，都是最直接的经验！
3，照猫画虎，我的第一批meta分析。
我的第一篇meta分析就出炉了，主要是因为太赶了。当时什么都不懂。
4，后来看了很多的书。
包括图书馆，丁香园的电子书。从书中了解了很多循证医学的基础知识，原来看论坛里面的帖子，都不知道各位在说什么，后来慢慢的能读懂些了。
5，与时俱进的论文。
我喜欢时刻检验自己的水平，每一个阶段都为自己设立一个目标。于是，勇敢的把论文投到核心期刊上面。结果等了两个月，结果遭到了主编的拒稿。最后一步一步修改才算入了门。所以范文和跟着教学视频实操非常重要。
所以，今天我们给大家免费分享：
“手把手教你实操Meta分析发SCI（含范文，原价2899元）”
原价2899元，现在免费发送给大家，如下即可免费获取：
🔽长按下方二维码关注🔽
对话框输入关键词：meta分析
01
资源截图：
一、8篇2021年12月出版的北大核心Meta分析范文：
二、手把手教你实操Meta分析发低分SCI论文（视频课）：
三、Meta分析实操发高分（视频课）：
【手把手教你实操Meta分析发SCI（含范文，原价2899元）】
长按下方二维码关注
回复关键词：meta分析
回复关键词：meta分析
回复关键词：meta分析
更多免费资源：
7 医学统计分析R版
11 SnapGene序列比对
15 R语言绘图模板
17 中文版RNAseq教程
21 更多资源在更新中.....
6 SPSS统计分析模板
8 铜铁死亡分析代码
10 m6A甲基化分析代码
12 qPCR计算模板
14 英文简历模板
16 R各种统计分析模板
18 46套生信分析代码
3 过表达引物设计
11 GO分析傻瓜式教程
13 GSEA分析傻瓜式教程
15 渐变火山图傻瓜式教程图
2 shRNA设计
10 超全生信数据库使用教程
12 KEGG富集分析教程
14 Meta分析范文+实操课
16 交集基因筛选高级教程
18 生信软件合集
辛苦整理，全文无任何广告！
觉得有用的话，您就点个在看、点赞!
