今天小编给大家分享一篇巨噬细胞浸润相关的文章，这篇文章于2024年1月发表在Acta Pharmaceutica Sinica B。
研究通过在胶原诱导性关节炎小鼠模型中应用GRK2活性抑制剂CP-25，揭示了GRK2在类风湿关节炎中的关键作用。
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类风湿关节炎（RA）是一种自身免疫疾病，需长期用药治疗。目前临床上使用的一些药物虽疗效明显，但不良反应是需要急切解决的问题，因此研发新药迫在眉睫。G蛋白偶联受体激酶2（GRK2）活性抑制剂通过恢复G蛋白偶联受体（GPCR）信号转导治疗RA和其他疾病有重要前景，且作为细胞中多种信号网络的调节中枢，其对细胞中关键分子的调控在RA中的作用和机制需要深入研究。
1.GRK2的表达水平与RA患者滑膜中MDMs的激活状态密切相关。结果显示，GRK2在RA中与MDMs浸润和激活状态密切相关。
2.GRK2敲除会削弱CIA的发展，结果表明GRK2敲除通过调节CCR2+巨噬细胞浸润来削弱CIA的发展，但其机制有待探索。
3.GRK2缺失对MDMs中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）信号通路的影响
RNA测序分析了GRK2f/f和GRK2f/fLyz2-Cre+/−/小鼠来源的BMDMs之间的差异表达基因，获得177个差异表达基因，GO分析显示这些基因主要富集在白细胞分化和迁移相关通路。PPAR信号通路同时出现在前5个上调基因组和下调基因组。
4.GRK2靶向PPARγ的Tyr473位点促进PPARγ激活
共聚焦激光扫描显微镜结果显示GRK2与PPARγ相互作用，Förster共振能量转移（FRET）分析进一步证实了GRK2和PPARγ之间的直接相互作用。此外共免疫沉淀实验和His Pull-down测定实验进一步表明GRK2直接与PPARγ相互作用并促进PPARγ活性。分子对接，发现GRK2与PPARγ之间的相互作用主要发生在PPARγ的配体结合域（LBD）。双荧光素酶报告系统表明，GRK2主要通过与PPARγ LBD相互作用来发挥作用。
5.GRK2-PPARγ缺失导致fms相关酪氨酸激酶1（Flt-1）的转录增加
RNA测序分析发现Flt-1在这些基因中的重要性。通过实验证实，GRK2缺失和PPARγ缺失的BMDMs中Flt-1的mRNA表达显著增加。
6.Flt-1促进MDMs迁移以驱动血管生成
使用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统、hTFtarget网站及双荧光素酶报告基进一步证实SMs中的Flt-1表达，RA中Flt-1的蛋白表达和mRNA表达增加。在体外条件下对BMDMs进行Flt-1基因敲除，结果表明Flt-1在MDMs迁移中起着促进作用。管状形成实验进一步证实了Flt-1在血管生成中的促进作用。
这篇文章揭示了GRK2通过与PPARγ互作来调节巨噬细胞功能的新机制，并展示了靶向GRK2活性抑制剂CP-25在减轻RA病理中的效果，为RA的治疗提供了新的分子靶点和治疗策略。
这些技术手段综合运用，使研究者能够从分子、细胞和整体水平上深入探究GRK2在RA中的作用机制，如您有相关课题或者实验检测需求，也可以联系我们协助完成。
文章使用的主要研究手段包括：
1.RNA-seq分析：用于鉴定GRK2缺失（GRK2f/fLyz2-Creþ/）小鼠模型中BMDMs（骨髓源性巨噬细胞）的基因表达差异。
2.双荧光素酶报告基因实验：用于验证GRK2与PPARγ之间的相互作用以及PPARγ对特定基因（如Flt-1）转录活性的影响。
3.免疫组织化学（IHC）和免疫荧光（IF）染色：用于检测组织切片中特定蛋白的表达和定位。
4.流式细胞术：用于分析和比较不同组别中特定细胞表面标志物的表达，如CD14、CCR2、CD11b、Ly6c等。
5.共免疫沉淀（CO-IP）：用于检测GRK2与PPARγ之间的直接相互作用。
6.His pull-down实验：用于研究GRK2与PPARγ之间的相互作用。
7.Förster共振能量转移（FRET）实验：用于在细胞内验证GRK2与PPARγ之间的直接相互作用。
8.分子对接分析：用于预测GRK2与PPARγ之间的结合模式。
9.细胞培养和3D细胞培养：用于体外培养巨噬细胞和其他细胞类型，以及模拟体内环境。
10.Western blot：用于检测特定蛋白的表达水平。
11.组织学检查：包括H&E染色、Safranin O染色和Toluidine blue染色，用于评估组织病理变化。
12.ELISA和LX-MultiDTM23技术：用于检测小鼠血清中多种细胞因子的水平。
13.CRISPR/Cas9基因编辑系统：用于构建GRK2基因敲除的Raw264.7细胞系。
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