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（直播开奖）课程回顾丨Cre工具鼠专题：剖析Cre/loxP重组酶系统

文摘 2024-08-30 18:55 广东

8月29日，赛业生物动物模型研发负责人牟星、赛业生物产品经理刘凡瑞主讲「Cre工具鼠专题：剖析Cre/loxP重组酶系统」线上课程，以下为本次直播常见问题汇总与解答。

FAQ:

1.如何判断Cre工具鼠的基因型？

2.如何验证Cre鼠是否有泄露，以及Cre酶在特异性组织细胞中的表达情况？

3.有没有建议的配繁顺序，是直接Cre和Flox配呢，还是Cre以及Flox各自配繁，得到各自的纯合再进行合笼呢？

4.他莫昔芬对于小鼠本身毒性及后续肝硬化造模的影响？

5.CreERT小鼠打他莫昔芬的时间，是不是越小诱导敲低效率越好呢？老年老鼠打了他莫昔芬好像敲低效果不理想？

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（*如遇回复不及时，请耐心等候）

Q

如何判断Cre工具鼠的基因型？

A. 转基因

特异性引物：一条引物设计在Cre上游或下游，别一条引物设计在Cre序列上。

通用引物：直接将一对引物设置在Cre序列上，该类鉴定不适用于动物房有多种Cre小鼠的情况，可能会搞混小鼠。

B. 定点插入

野生型：仅可鉴定到1条野生型条带

杂合子：可鉴定到2条条带：野生型和阳性

纯合子：可鉴定到1条阳性条带

注意事项：鉴定时做好对照，包括阳性对照、WT及阴性对照（水），防止PCR体系，如引物污染、样品质量问题等。

A

Q

如何验证Cre鼠是否有泄露，以及Cre酶在特异性组织细胞中的表达情况？

1、取鼠尾使用工具鼠特异性的引物鉴定，确定Cre阳性。

2、若配了Flox小鼠的子代，先取鼠尾确定携带Cre阳性，再取特异性组织确认删除情况。

3、若取特异性组织会处死小鼠，注意预留繁殖对及子代。

4、携带Cre基因的鼠未在特异组织发生删除，这与Cre工具鼠的删除效率及实验取材的精准度有关。

A

Q

有没有建议的配繁顺序，是直接Cre和Flox配呢，还是Cre以及Flox各自配繁，得到各自的纯合再进行合笼呢？

步骤1：(flox/+)杂合小鼠互配获得(flox/flox)纯合小鼠。

步骤2：全身或组织特异性Cre工具鼠与(flox/+)杂合小鼠或者(flox/flox)纯合小鼠互配获得。

步骤3：[flox/+,Cre(+/-)]小鼠与(flox/+)或(flox/flox)互配得到[flox/flox,Cre(+/-)]小鼠。

A

Q

他莫昔芬对于小鼠本身毒性及后续肝硬化造模的影响？

1、TAM对小鼠会产生肝脏毒性、胚胎毒性以及其他副作用，包括体重下降等。

2、降低剂量、分次给药以及给药方式可以帮助减少毒性，例如有TAM口服剂量对妊娠小鼠的毒性较小的报道。

3、建议设置一组Cre小鼠TAM给药对照，排除是否是Flox结合，目的基因敲除引起的死亡。

4、条件允许的情况下可以结合对肝毒性更小的四环素系统（Tet-on/off）作为诱导药物替代传统毒性大的TAM。

A

Q

CreERT小鼠打他莫昔芬的时间，是不是越小诱导敲低效率越好呢？老年老鼠打了他莫昔芬好像敲低效果不理想？

1、老年小鼠的药物代谢能力可能减弱，影响他莫昔芬的生物利用度和效应。

2、常见的诱导时间为6周龄小鼠，需要据具体的研究目的，优化TAM的给药方案。

3、建议进行预实验，确定最佳剂量、给药频率和时间间隔，以获得理想的基因敲除效果。

A

课程指南

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