两篇毕业论文致谢同一个女朋友？

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今天，小编手把手教大家定点突变：

首先手上要有完整的碱基序列。一般来说，用snapgene (点击免费下载)可以打开，打开之后大概就是这个样子。

下面说两种方法确定突变引物。让我们假设这次我们要突变的位点是C259A，即上图枣红色标注的位点，可以看到它的密码子是TGT。一般来说我们突变后的氨基酸的密码子应该遵循在人类中表达概率最高，密码子表达概率可以从这个网站看到 Codon Usage Frequency Table(chart)-Genscript 注意红框处要选择物种，一般来说会选择human，然后一定要点击下方的submit。

然后我们看下面刷新出来的表格：

比如我们要突变成A，那么我们找到A，看到有四个密码子都可以编码A，但是GCG的概率要比其它密码子要高，所以我们就选择将TGT变为GCG。

由于我们使用的突变试剂盒来自于NEB，所以打开它的网站计算pcr的退火温度。NEB Tm Calculator 界面如下图所示，注意红框里的选项要和自己的试剂盒对应，不要弄错。

接下来，就是输入primer1和primer2，我们可以直接打开snapgene，对于前向引物，以突变的三个密码子为开头，往下延伸复制，一般引物最好不少于15bp，也不能太长，宗旨是，网站给出的总体的退火温度不要超过70℃，因为延伸温度是72℃，退火温度要和延申温度区分开来。对于反向引物，从突变位点前面的密码子开始往前延伸复制，反向引物的复制的选项如下图所示。引物可以多复制，粘贴到上图中，温度过高可以从后往前删减即可。

除此之外，还可以登录NEB的设计引物的网站，NEBaseChanger_V1 在这个网站上粘贴密码子序列，在右侧start（5‘）和End（3’）处分别填入起始和终止改变的密码子位置。Find处可以不填。Desired Sequence写成GCG，下方就会自动生成引物，但这里显示的温度是不准确的，还需要到NEB Tm Calculator中通过加加减减密码子来调整温度，这里给出的引物是把突变的密码子放在引物中间而不是起始了，也是可以的。

突变引物设计好了之后，填写表格就可以送公司合成了。除此之外，我们还需要设计该突变的测序引物，我们突变完需要通过测序来看突变是否成功。那么测序引物要怎么设计呢？GenScript Sequencing Primer Design 使用这个网站，粘贴DNA序列。400bp的意思是每隔400个bp会设计一个测序引物。

粘贴序列然后点击design primer

我们突变的氨基酸位点是259，乘以3，碱基位置是777，选择FOR_1即可，可以看到start site是350，一般的原则是start site最好在突变位点前至少一百五到两百，因为我们一般来说测序测800bp，前一百五和后一百五bp会不太准确。

此外，现在GEO等数据库已经有很多RNA测序数据了。我们可以自己下载这些数据并个性化分析从而放在自己的SCI论文中。所以，今天给大家免费发送：

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2023年国家自然科学基金资助项目总计【47160项】。其中面上项目20321项、重点项目751项、重点国际（地区）合作研究项目74项、青年科学基金项目22879项、优秀青年科学基金项目630项、国家杰出青年科学基金项目415项、创新研究群体项目43项、地区科学基金项目3538项和外国学者研究基金项目109项。 

因此，科研部今天给大家免费发送：

“2023国自然标书（原价9877元）”

2023年的标书，为申报2024当作模板刚刚好（原价9877的国自然内部培训资料，现在免费发送给大家），涉及八个学部。我们生科和医学都是研究如DNA、RNA（mRNA、miRNA，circRNA、tRNA）、蛋白质、分子结合（RNA结合蛋白、IP）、分子修饰（磷酸化、乙酰化、）、神经外科、神经内科、免疫应激、心血管、儿科、胃肠道、骨科等。这些标书就可以当作模板。每份标书都是完整的，非常具有参考意义，如下：

（为保护隐私，已打码，下载的标书是没有打码的哦）

特别是一些别人则会那个在研究的东西，靠这边走就行。还有就是对于新手来书，实验经费那一块怎么写？每个实验花费多少？这些直接复制粘贴就行。

“2023国自然标书（原价9877元）”

标书截图如下：

一、医学科学部（部分截图）：

二、生命科学部（部分截图）：

三、地球科学部（部分截图）：

四、工程与材料部（部分截图）：

五、管理科学部（部分截图）:

六、化学科学部（部分截图）:

七、数理科学部（部分截图）：

八、信息科学部（部分截图）:

这些标书我已经上传百度云了，需要的赶快保存起来：

【2023国自然标书（原价9877元）】

顶级CNS插图如下：

但是自己画一只小鼠可能需要花一整天的时间。

所以，今天小编给大家免费赠送：

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生物医学之家CNS插图素材部分截图如下：

这些素材都是用Adobe illustrator绘制的，打开后可以继续编辑修改，这些素材原价是9999元的，现在免费给大家送永久账户。如下免费获取永久VIP账户：

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一、比如我需要用到小鼠插图来描述自己的小鼠动物实验模型，那就直接搜索鼠，有几百张小鼠插图就出现了：

有了VIP账号之后就可以随意下载。下载下来是AI绘制的可编辑图：

可以随意修改颜色：

也可以随意修改大小：

Ctrl+c和V复制粘贴到自己的画板中，并对齐：

随后画一条线，示意要D369打药：

随后添加字体，这样审稿人一看就知道你做了什么动物模型。

最后保存和导出，一定要记得保存，保存就是矢量图了，以后还能修改。导出就是导出为图片，用来讲PPT或者投稿。

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还有，我们下载的素材，也可以右键取消分组：

然后修改任何一个你想要修改的元素，比如修改液体的颜色：

也可以将注射器放在背上，模拟皮下注射：

还可以将小鼠变为黑色：

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二、比如我需要绘制细胞机制图。那就搜索细胞：

有了这些素材，分分钟就可以绘制如下这种高分插图：

三、各种Nature插图原图：

下载下来之后每个细微的元素都可以修改：

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