要实现某个表型在细胞内的稳定表达，可以通过引入点突变进行操作，即将外源突变位点通过同源末端重组替换基因组中特定的位点。然而，构建点突变细胞的过程中，研究人员常常面临诸多挑战：
同源重组的效率低，导致成功替换突变位点的概率下降；难以筛选及获得点突变纯合子；培养出来的细胞生长缓慢、状态差影响实验结果和后续研究……
相比于基因敲除细胞株，点突变细胞株的构建涉及复杂的分子克隆技术和高通量筛选，同时在设计实验方案时，需要考虑基因片段长短、同源重组效率等多种因素，不同细胞株编辑效率差异很大，构建难度偏高。
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