在现代生物技术和制药行业中,重组蛋白的制备是关键环节之一。而杆状病毒表达系统(Baculovirus Expression Vector System, BEVS),作为一种高效的真核表达平台,自上世纪80年代末发展至今,已在重组蛋白生产中占据了重要地位,尤其在疫苗制造[1]、抗体工程[2]、酶制剂开发[3]等领域展现出了卓越性能。
flashBAC™的核心是缺失了杆状病毒基因组AcMNPV部分必需基因ORF1629;并且用人工染色体BAC替换polh编码序列,必需基因的缺失阻止了病毒在昆虫细胞中的复制,而BAC序列则保证杆状病毒基因组以bacmid的形式保存在细菌中。将flashBAC与携带目的基因的转移载体共转染昆虫细胞后,只有成功同源重组的病毒才能在昆虫细胞中复制并生成重组病毒,并且大多数情况得到的P0代病毒无需进行空斑纯化。但如果是进行大规模应用或者工艺优化,建议进行一轮空斑纯化。
flashBAC系统操作流程
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flashBAC杆状病毒表达系统的优点
➢ 更简单的操作流程:使用flashBAC,仅需一步转染,即可得到高滴度病毒;最快12天可得到目的蛋白。
➢ 表达后期蛋白更加稳定:相比其他杆状病毒表达系统,表达96h后依然可以检测到大量目的蛋白表达。
➢ 重组病毒更加稳定:使用flashBAC得到的重组病毒传代到P8依然可以大量表达蛋白。
➢ 蛋白表达量更高:flashBAC载体缺失了不同的非必需基因,最大化蛋白表达量。
➢ 最大限度地提高:分泌蛋白、膜蛋白、难以表达的蛋白的表达量;最大化VLP生产和释放。
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OET公司提供的flashBAC载体列表:
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参考文献
[1] Lu, Hsin-Yu et al. “Baculovirus as a vaccine vector.” Bioengineered vol. 3,5 (2012): 271-4. doi:10.4161/bioe.20679.
[2] Wahba, Mohamed A et al. “Baculovirus displaying SARS-CoV-2 spike RBD promotes neutralizing antibody production in a mouse model.” Journal, genetic engineering & biotechnology vol. 21,1 16. 9 Feb. 2023, doi:10.1186/s43141-023-00472-2.
[3] Kim, C M et al. “Expression and characterization of two beta-adrenergic receptor kinase isoforms using the baculovirus expression system.” Receptor vol. 3,1 (1993): 39-55.
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