【昆虫细胞表达】flashBAC系统一步法生产重组杆状病毒

健康   2024-10-18 17:04   北京  

在现代生物技术和制药行业中,重组蛋白的制备是关键环节之一。而杆状病毒表达系统(Baculovirus Expression Vector System, BEVS),作为一种高效的真核表达平台,自上世纪80年代末发展至今,已在重组蛋白生产中占据了重要地位,尤其在疫苗制造[1]抗体工程[2]酶制剂开发[3]等领域展现出了卓越性能。

flashBAC的核心是缺失了杆状病毒基因组AcMNPV部分必需基因ORF1629;并且用人工染色体BAC替换polh编码序列,必需基因的缺失阻止了病毒在昆虫细胞中的复制,而BAC序列则保证杆状病毒基因组以bacmid的形式保存在细菌中。将flashBAC与携带目的基因的转移载体共转染昆虫细胞后,只有成功同源重组的病毒才能在昆虫细胞中复制并生成重组病毒,并且大多数情况得到的P0代病毒无需进行空斑纯化。但如果是进行大规模应用或者工艺优化,建议进行一轮空斑纯化。

flashBAC系统操作流程



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flashBAC杆状病毒表达系统的优点

➢ 更简单的操作流程:使用flashBAC,仅需一步转染,即可得到高滴度病毒;最快12天可得到目的蛋白。

➢ 表达后期蛋白更加稳定:相比其他杆状病毒表达系统,表达96h后依然可以检测到大量目的蛋白表达。

 重组病毒更加稳定:使用flashBAC得到的重组病毒传代到P8依然可以大量表达蛋白。

➢ 蛋白表达量更高:flashBAC载体缺失了不同的非必需基因,最大化蛋白表达量。

 最大限度地提高:分泌蛋白、膜蛋白、难以表达的蛋白的表达量;最大化VLP生产和释放。

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OET公司提供的flashBAC载体列表:



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参考文献

[1] Lu, Hsin-Yu et al. “Baculovirus as a vaccine vector.” Bioengineered vol. 3,5 (2012): 271-4. doi:10.4161/bioe.20679.

[2] Wahba, Mohamed A et al. “Baculovirus displaying SARS-CoV-2 spike RBD promotes neutralizing antibody production in a mouse model.” Journal, genetic engineering & biotechnology vol. 21,1 16. 9 Feb. 2023, doi:10.1186/s43141-023-00472-2.

[3] Kim, C M et al. “Expression and characterization of two beta-adrenergic receptor kinase isoforms using the baculovirus expression system.” Receptor vol. 3,1 (1993): 39-55.



Oxford Expression Technologies(OET)公司专门从事重组蛋白表达,向全球制药和生物技术行业提供产品、服务和咨询,是世界著名的杆状病毒蛋白表达中心。OET于2007年由牛津布鲁克斯大学及自然环境研究委员会联合成立,位于英国牛津,其核心技术flashBACTM是一种基于杆状病毒的蛋白表达系统,能快速生产适用于小型和大型蛋白表达系统的重组病毒。OET产品还涉及昆虫和哺乳动物表达系统中的载体、转染试剂和培养基。



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