前言
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最近几个同行经常会聊到处理各种疑难标本前处理的话题,其中最为热门的无疑是乳糜标本的前处理。今天我们来探讨一下甘油三酯测定中高速离心法处理乳糜标本的意义。(笔者也会穿插几种其他处理乳糜标本的方法,但仅为简要概略,不详细介绍,后期推文会详细讲解)
02
什么叫乳糜血
一、乳糜血的基本概念
乳糜血又称脂血,是指血液中含有大量的乳糜微粒,使血液呈现出乳白色或混浊状。
二、乳糜血的形成原因
饮食因素
摄入过多高脂肪、高胆固醇的食物,如动物内脏、油炸食品、奶油等。这些食物中的脂肪在肠道被消化吸收后,形成大量的乳糜微粒进入血液。
短时间内大量进食富含脂肪的食物,尤其是在空腹状态下进食油腻食物,更容易导致乳糜血的出现。
遗传因素
某些遗传因素可能影响脂肪代谢,导致个体更容易出现乳糜血。例如,家族性高胆固醇血症患者由于遗传缺陷,导致胆固醇代谢异常,容易出现高脂血症和乳糜血。
疾病因素
糖尿病:糖尿病患者由于胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗,导致血糖升高,同时也会影响脂肪代谢,使血液中甘油三酯和胆固醇水平升高,容易出现乳糜血。
甲状腺功能减退症:甲状腺激素对脂肪代谢有重要调节作用,甲状腺功能减退患者甲状腺激素分泌减少,脂肪代谢减慢,容易出现高脂血症和乳糜血。
肾病综合征:患者大量蛋白尿导致低蛋白血症,肝脏合成脂蛋白增加,同时脂肪代谢紊乱,容易出现高脂血症和乳糜血。
其他因素
肥胖:肥胖者体内脂肪组织增多,脂肪代谢活跃,容易导致血脂升高和乳糜血。缺乏运动:长期缺乏运动,身体代谢减慢,脂肪在体内堆积,容易出现高脂血症和乳糜血。某些药物:如糖皮质激素、利尿剂等,可能影响脂肪代谢,导致血脂升高和乳糜血。
废话不多说,我们来看一下乳糜标本在常见的检测情境下的状态
乳糜血清经4000Rpm-15min离心后在采血管的状态
乳糜血清经4000Rpm-15min离心后在日立杯的状态
下面我们来进行一系列实验来验证高速离心是否有意义
实验材料:
随机选取日常检测中发现的乳糜血清2份、高速离心机、EP离心管若干、移液器、日立7600-020全自动生化分析仪、北京安图生物甘油三酯测定试剂(GPO-PAP法)
实验原理:
甘油三酯在脂蛋白脂肪酶(LPL)的作用下,被水解为甘油和游离脂肪酸。甘油在甘油激酶(GK)的催化下,与三磷酸腺苷(ATP)反应生成 3 - 磷酸甘油和二磷酸腺苷(ADP)。3 - 磷酸甘油在磷酸甘油氧化酶(GPO)的作用下被氧化为磷酸二羟丙酮和过氧化氢(H₂O₂)。最后,在过氧化物酶(POD)的催化下,H₂O₂与 4 - 氨基安替比林(4-AAP)和对氯酚(或苯酚等)反应生成红色的醌亚胺化合物。通过比色测定醌亚胺化合物的吸光度,即可计算出甘油三酯的含量。
反应式如下:
实验过程:
1.将两份乳糜血清标记为A样本、B样本各取500ul分别至于标记为A1、B1的EP管中,在12000Rpm 4℃下高速离心20min。
2.等待离心过程中,取A、B样本各500ul,不作任何处理,分别置于标记为A2、B2的日立杯中,放入标本架上,将标本架置于样品托板上,于仪器操作电脑中将A2、B2编号为847、849,行TG测定(当日TG测定质控在控)。
3.将高速离心后的A1、B1样本从离心机中取出,取最下清血清100ul(如图所示),置于分别标记为A1、B1的日立杯中,放入标本架上,将标本架置于样品托板上,于仪器操作电脑中将A1、B1编号为846、848,行TG测定。
结果与曲线如下
由此我们发现高速离心处理乳糜标本,虽已经消除CM、VLDL等小分子蛋白的影响,但从首诊患者临床决定水平的角度来看,差异并不是很大,由于乳糜状态下的患者血液中甘油三酯本就处于高水平状态,测得的甘油三酯数值仅能提供乳糜状态下患者的甘油三酯水平,因此在临床实践中,如发现患者出现高浓度甘油三脂检验结果,应当第一时间与检验科沟通患者是否出现乳糜状态,同时,检验科当日报告审核人应当在出具报告时于报告系统中备注:“标本乳糜,结果仅供参考。”等字样。
目前,患者乳糜状态下不建议多次监测甘油三酯水平,临床医生应当在患者服他汀类等降低甘油三酯药物的一个疗程、消除乳糜状态后,测定甘油三脂水平。
总结
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虽然高速离心处理后测定甘油三酯水平的临床意义并不大,但有国内外相关文献表示,经高速离心后处理的血清样本在酶法,胶乳比浊法等部分测定中具有良好的效果和临床意义。当前处理标本乳糜的方法除了稀释法、高速离心法之外,还有PEG6000沉淀法、磷钨酸-镁沉淀法、MOPS沉淀法、固相萃取柱法等。从平衡实验室TAT要求、经济效益、结果正确度角度看,稀释是基层实验室最佳选择。但最终综合来看,如非急诊急查状态,应当在避免乳糜的情况下进行患者各项指标测定,如果临床医生所在单位实验室具有干化学生化分析仪,在明知患者处于乳糜状态下,应当优先选择干化学法。
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