传统 PCR 检测试剂一般分为：反应液、酶液、引物探针 3 管或者其中 2 者混合以 “A+B” 形式 2 管提供对应检测。每次检测前先计算用量并将对应组分振荡混匀后使用。此种形式一方面操作比较复杂，容易出错，对操作人员操作技能有一定的要求；另一方面试剂以 “现配现用” 方式使用，多配制试剂会造成浪费，配制过程也容易造成污染。
传统的 PCR 检测 “A+B” 形式在常规检测场景中堪堪够用，但是随着新冠普筛以及各大厂商国际市场的拓展，分子市场对 RNA 一管式液体全预混反应液（RNA 全预混，反应液、酶液、引物探针提前预混在一管）的呼声越来越高。
RNA 全预混避免了客户终端配制，简化操作的同时降低了客户操作出错的概率，同时 RNA 全预混具有相当高的稳定性，有利于客户国际的推广和运输保存。
但是，目前市面上并没有一个具有稳定且广泛普适性 RNA 全预混原料。目前行业中仅有极少数企业能够搭建 RNA 全预混项目，但这些试剂加速稳定性仍然具有问题，且仅适配极个别项目，同时搭建的路径要么是舍弃快速检测性能，要么是定制版试剂，不具有普适性。
全预混体系中，除模板外的所有组分（酶、镁离子、dNTPs、引物探针）已经预先混合。长期保存过程中，引物与引物以及引物和探针之间容易产生二聚体或二级结构，导致体系内部出现非特异性扩增，增加了体系复杂性，限制后续主反应进行，并消耗反应所需组分。这会导致加速后扩增曲线荧光强度下降、Ct 值滞后，或者出现 Ct 值大幅提前，大大增加假阳性概率。降低体系中各主要成分的用量虽可一定程度短期提升试剂稳定性，但会影响试剂性能，尤其是在快速检测方面，此方法不可取。
目前的 RNA 全预混主要技术瓶颈在以下 3 点：
☞1. 使用的功能性酶液的活性封闭不够完全。Taq DNA 聚合酶的聚合和切割活性未完全封闭以及逆转录酶低温和室温下的活性未完全封闭导致全预混试剂稳定性出现问题；
☞2. 长期保存中酶液酶活严重下降或者失活，从而导致全预混试剂性能出现问题；
☞3. 全预混试剂加入引物探针后，长期保存或者加速中引物二聚或者引物探针间的二级结构形成，导致体系反应复杂程度提升，从而导致试剂稳定性出现问题。
如何构建一个
稳定且具有广泛普适性
RNA 一管式液体全预混反应液MIX
(简称：RNA全预混)
是分子诊断行业面临的严峻的问题！
文末参与【免费试用】
为顺应行业发展趋势解决这一难题，瀚海新酶集中力量研发全预混试剂，在 Taq DNA 聚合酶、热启动逆转录酶、反应体系、耗材等方面，进行充分验证和优化：
1. Taq DNA 聚合酶(抗体修饰)
推进适配全预混的热启动 Taq DNA 聚合酶的研发。确保 Taq DNA 聚合酶的聚合和切割活性被彻底封闭，同时又能在反应时迅速失活；
2. 热启动逆转录酶（核酸适配体修饰）
推进适配全预混的热启动逆转录酶的研发。确保在低温或者常温时逆转录酶的活性基本被封闭完全，同时提高酶液稳定性。
3. 反应体系
通过DOE的方法，对反应体系进行优化，降低体系引物探针之间的二级结构产生概率，优化低值区曲线形态，同时尽可能提高试剂检出率；
4. 耗材
不合适的耗材容易导致酶液失活或者吸附引物探针，瀚海新酶通过对比测试市面上主流的耗材，筛选出适配全预混的耗材清单；
此外，瀚海新酶还对早期二聚体的抑制进行了深入研究，以确保试剂的长期稳定性和优异性能。
同时为了更好地响应客户需求、提升试剂性能和适配性，瀚海新酶建立并验证了包含：呼吸道、血液、肠道、兽用等领域多达上百个靶标的体系和严格的考核标准，以不断优化RNA全预混试剂的各项性能。
达成效果
瀚海与竞品全预混试剂，在甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒混合检测项目中37℃加速10天检测结果（红色曲线为加速后曲线）
相关产品及服务
● 1. RNA 全预混试剂（可立管版本和预分装版本）
● 2. DNA 全预混试剂（可立管版本和预分装版本）
● 3. 全预混的热启动 Taq DNA 聚合酶（抗体修饰）
● 4. 全预混的热启动 MMLV 逆转录酶
同时，瀚海新酶还可提供：试剂定制调优、引物探针定向设计及调优等 CRO 服务。
*活动规则*
1.仅限终端客户参与，同一企业机构仅限参加1次，且不与其他同类型活动同期参与；
2.如申请成功，将在提交后3个工作日内与您取得联系，敬请耐心等待；
3.本活动最终解释权归武汉瀚海新酶生物科技有限公司所有。
如您有任何疑问，欢迎与我们联系
-END-
来源：瀚海新酶 供稿：Bonnie
投稿邮箱：tougao@caivd-org.cn
精彩推荐
①本公众号原创发表的内容的最终解释权及版权归智奥瑞和（上海）展览有限公司所有。如需转载，须在文首位置注明转自“CACLP体外诊断资讯”，并请在信息栏输入“转载”，获取转载须知。②本公众号注明来源的文章为转载，不代表本平台观点和立场。③ 媒体合作：021-52258212
