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国家杰青,前武大基础医学院院长李红良,任赣南医科大学学术副校长:
据江西政读官微,1月7日,江西任免一批领导干部,聘任李红良为赣南医科大学副校长(学术,聘期3年)。
公开资料显示,李红良,1974年9月出生,理学博士,江西赣州人。教授、博士生导师,国家杰出青年科学基金获得者(2014年)、科技部中青年科技创新领军人才、国家“万人计划”领军人才。江西省第十四届人大代表,重大疾病新药靶发现及新药创制全国重点实验室执行主任,赣南创新与转化医学研究院院长,江西省模式动物工程研究中心主任,武汉大学二级教授。
据公开报道,2020年7月,李红良曾卷入“小学生女儿研究喝茶抗癌获奖”事件,被武汉大学免去模式动物研究所所长及模式动物协同创新中心主任。此后9月15日的武汉大学基础医学院换届大会上,李红良主动辞任了基础医学院院长职务。2021年李红良曾被科技部通报“较多论文存在图片误用,反映实验数据处理不严谨”。
李红良主要研究方向为心血管代谢性疾病发病机制和防治及模式动物的开发。已发表国际重要杂志论文260余篇,包括发表在Nat Med., Cell Metab., Sci Transl Med, PNAS, Circulation, Hepatology等国际知名杂志;SCI总引用次数近20000余次;连续9年入选年度中国高被引学者榜单(医学)。
李红良曾入选2023全球前2%顶尖科学家榜单,位列2018-2022年全国心血管病领域学者学术影响力排名第一。他曾申请国家发明专利200余项,其中获得授权专利150余项。承担国家级、省部级项目近30项。他曾获得国家科学技术进步二等奖、中国产学研合作奖、省科技进步一等奖、谈家桢生命科学创新奖、药明康德生命化学研究奖、美国心脏病学会心血管病研究奖、中国杰出心血管病研究奖等各类奖项20余项。
2024年1月,重大疾病新药靶发现及新药创制全国重点实验室执行主任、赣南创新与转化医学研究院院长李红良当选为江西省医学会副会长。
2024年5月29日,李红良被列入2024年江西省“最美科技工作者”名单。
赣南医科大学
赣南医科大学(Gannan Medical University),位于江西省赣州市,是江西省人民政府举办的全日制普通高等医学本科院校,江西省一流学科建设高校。
学校前身是创办于1941年的江西省立赣县高级助产职业学校,1947年更名为江西省立赣县高级医事职业学校,1958年设置为专科建制的赣南医学专科学校,1988年升格为本科院校并更名为赣南医学院,2013年获批为硕士学位授予权单位,2015年获评江西省高校教育信息化学会先进单位。 2023年11月经中华人民共和国教育部批准同意,更名为赣南医科大学。
截至2024年6月,学校占地总面积2600余亩,设黄金、章贡、龙南3个校区;教学科研仪器设备总值3.29亿元,图书馆纸质藏书144.15万册,电子藏书231.2万册;有直属附属医院3所,非直属附属医院11所;设有19个院系,开设有本科专业31个;有硕士学位授权一级学科4个,硕士专业学位授权点6个;有专任教师957人,全日制在校生15926人。
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如医学部有1万左右:
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对于申报杰青、优青、长江的科研人员,一份已中的PPT模板可以很好的参考,思路逻辑格式等等:
比如优青答辩PPT:
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CRISPR-Cas9系统是一种基于细菌和古细菌中天然适应性免疫机制的基因编辑工具。它利用Cas9蛋白和一种向导RNA(sgRNA)结合DNA靶点,从而实现对特定基因的敲除或敲降。其原理如下:CRISPR-Cas9通过向导RNA(sgRNA)识别靶基因,并由Cas9蛋白切割靶DNA产生双链断裂。当sgRNA引导Cas9蛋白到达靶位点后,Cas9会检测靶位点下游是否存在特定的PAM(通常为5'-NGG-3'),且对PAM序列上游第3个碱基和第4个碱基之间进行切割:随后,细胞通过非同源末端连接(NHEJ,易于引入插入或缺失突变(indels),导致靶基因编码框移位或功能丧失,达到敲除或敲降的目的。)修复引入突变,导致基因失活。或通过同源定向修复(HDR,如果提供一个模板DNA,细胞可能利用该模板精确修复切口,用于定点突变或插入序列。)进行精确编辑。我这里举一个例子,如下,比如你的DNA如下,你的sgRNA是靶向GGGCAAGAACGGGGTATTCG:那后面的TGG就是PAM序列。cas9蛋白会对PAM序列上游3和4碱基(即TT之间)之间进行切割。那切割之后就是----GGGCAAGAACGGGGTAT TCG----。同时切开后细胞会对DNA进行NHEJ修复。这个时候切口两边的T都可能丢失掉。随后最后你的细胞的DNA最终变为了GGGCAAGAACGGGGTATCG,减少了一个T,也就是发生了移码突变,你的DNA就不会转录出RNA,也不会翻译得到蛋白质了,也就是基因敲除。这只是你筛选的单细胞的一种可能,可能你筛选了50个单细胞,长到6cm皿后做PCR检测序列的时候可能有很多种可能:目前,比较商业化的CRISPR-Cas9质粒是57818质粒:这个质粒带有EGFP荧光,sgRNA酶切位点和Cas9蛋白。这个质粒一般是通过BsmBI酶切两个位点切开后,将目的sgRNA替换上去,从而完成目的CRISPR-Cas9质粒的构建:下面我们教大家如何构建sgRNA质粒(已经验证过的,放心使用)。首先是sgRNA设计(www.swyxzj.com,生物医学之家):那,GAGACGTGCGAGAAACTCAA是靶向的DNA序列,靶向的是WNT4基因的第二个外显子,非常不错,不过最理想的是靶向第一个外显子,这样我们移码突变的效果最好。最后我们需要订购的oligo就是(两边是bsmbi连接序列,所以下面这个序列是万能序列,你只要替换中间的sgRNA序列就行,因为酶切位点连接位点是一样的):两条oligo,订购的时候记得告诉公司,每一条oligo都需要5端磷酸化(因为有了这个修饰,我们后面才能连接到切开的57818质粒上,没有磷酸化就不能连接或者说连接效率低下)。为了方面做好记录,我们可以将这个sgRNA模拟出来,如下用snapgene,点击action---anneal oligo:
那有个这两个片段,我们就可以模拟最后构建好的57818-WNT4sgRNA质粒,如下:
点击action-insertion cloning--insert fragment:
最后这就是我们的完整质粒啦:
OK,以上为理论,现在我们要开始讲实验啦。首先是订购的单链oligo退火形成双链,体系如下:GE100007是货号,95到25度,每下降5度后呆5分钟,一直到25度,大约是70分钟。
随后是57818的bsmbi酶切,要注意bsmbi这个酶需要新鲜的DTT,同时这两个位点太近了,所以需要加入FastAP防止自连。37度酶切1.5小时。然后65度20分钟停止酶切和75度5分钟抑制FastAP活性,随后将酶切产物跑胶1.5小时,胶回收,最后测DNA的浓度:
最后是连接,首先将退火的sgRNA双链稀释200倍后用于下面的实验。加入的体系如下(ps:这个体系也是万能体系,反正就是加入100ng的酶切空载,所以你需要修改的就是5.6ul这个数字,根据你自己的来):
16度酶切16小时,65度10分钟终止酶切。最后就是转化,将质粒转化到大肠杆菌中。从-80℃冰箱中取出对应的感受态细胞DH5a 50uL,室温下置于冰盒上解冻5-10分钟,标记;向感受态细胞中加入5µl的质粒,置于4℃冰箱中,冰浴30min;在42℃水浴锅中热激90s,然后立即在冰盒上放置2min;每管加450µl LB培养基,37℃摇床震荡,220rpm×45min;取100µl 转化液加入对应抗性(这里是AMP+,氨苄抗性)的平板中,涂匀液体;将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养过夜。最后就是挑取单克隆摇均提取质粒后送公司测序,给公司质粒,并告诉公司用U6-F或者LKO.15测序就行,一般测一个循环1000bp左右:
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